ICS65.120B46DB35福建省地方标准DB35/T1276—2012饲料中三聚氰胺快速检测酶联免疫吸附法RapiddetectionofmelamineinthefeedEnzyme-linkedimmunosorbentassay（ELISA）2012-07-23发布2012-10-20实施福建省质量技术监督局发布DB35/T1276—2012I前言本标准根据GB/T1.1-2009给出的规则编写。本标准由福建省农业厅提出并归口。本标准主要起草单位：福建蓝昊生物技术有限公司、国家加工食品质量监督检验中心（福州）、福建出入境检验检疫局。本标准主要起草人：李昊、郑小严、陈健、翁惠玲、王天西、林钦、何孟杭、沈晓妙、高小尧、饶平凡。DB35/T1276—20121饲料中三聚氰胺快速检测酶联免疫吸附法1范围本标准规定了饲料中三聚氰胺的酶联免疫吸附测定（ELISA）方法。本标准适用于饲料原料、预混合饲料、配合饲料、浓缩饲料中三聚氰胺的测定。本方法定量测定检出限为0.01mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T20195动物饲料试样的制备3原理试样中三聚氰胺、酶标三聚氰胺抗原与包被于微量反应板中的三聚氰胺抗体进行免疫竞争反应，加入酶底物后显色，试样中三聚氰胺含量与颜色深度成反比，用目测法与三聚氰胺标准系列进行半定量检测，用仪器法进行定量检测。4试剂和材料除非另有规定，所有试剂均为分析纯，水为蒸馏水或去离子或相当纯度的水。4.1三聚氰胺酶联免疫试剂盒中的试剂4.1.1包被抗三聚氰胺抗体的聚苯乙烯微量反应板。4.1.2样品稀释液（0.01mol/LpH7.4磷酸盐缓冲液）：称取3.628g磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）、0.2000g磷酸二氢钾（KH2PO4）、8.000g氯化钠（NaCl）、0.2000g氯化钾（KCl），加水溶解，定容至1L。4.1.3三聚氰胺标准溶液：准确称取0.1000g三聚氰胺加甲醇溶解，并用甲醇定容至100mL，配制成1mg/mL三聚氰胺标准溶液。用样品稀释液进行精确稀释（用容量瓶），得到三聚氰胺标准溶液，浓度为0μg/mL、0.01μg/mL、0.03μg/mL、0.1μg/mL、0.3μg/mL、1μg/mL。4.1.4三聚氰胺酶标记物：三聚氰胺-辣根过氧化物酶交联物。DB35/T1276—201224.1.5清洗液：吸取0.5mL吐温-20于1000mL样品稀释液中。4.1.6底物溶液：3,3,5,5-四甲基联苯胺（TMB）底物溶液。4.1.7反应终止液：硫酸溶液，c（H2SO4）=1mol/L。4.2正己烷。5仪器和设备5.1小型粉碎机。5.2分析天平：感量0.0001g和0.01g。5.3离心...
