ICS01.040.67X60DB34安徽省地方标准DB34/T2560—2015窖泥微生物群落结构快速定量测定PSP-qPCR绝对定量法QuicklydetectionmethedtoquantifypitsmudmicrobialcommunitiesPSP-absoluteqPCRmethod文稿版次选择2015-12-30发布2016-01-30实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T2560—2015I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省浓香型白酒标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：安徽瑞思威尔科技有限公司、安徽古井贡酒股份有限公司、哈尔滨工业大学。本标准起草人：何宏魁、周庆伍、李安军、刘国英、余秀娟、汤有宏、葛向阳、张会敏、蒋军、聂加燕。DB34/T2560—20151窖泥微生物群落结构快速定量测定PSP-qPCR绝对定量法1范围本标准规定了一种基于门特异性引物测定窖泥微生物群落结构组成的快速定量优化方法。本标准适用于窖泥中微生物群落结构的快速定量检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1门特异性引物phylum-specificprimers，PSP指特异性扩增某个门的所有微生物基因序列所共有且相对于其余门的微生物基因序列所独有的基因序列的引物对，由一条正向引物（5’→3’）和一条反向引物（3’→5’)组成。3.2荧光定量PCRquantitativePCR，qPCR又称real-timePCR，荧光反转录-聚合酶链反应。3.3Ct值cyclethresholdvalue指PCR反应体系中目标DNA浓度达到人为确定的阈值时的PCR循环次数。3.4TA克隆TAClone是一种亚克隆方式，在连接酶存在的情况下，依赖DNA链两端的腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）的互补作用，将不同DNA链连接。4原理DB34/T2560—20152实时荧光PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监控整个PCR过程。将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得Ct值，进而根据未知样品的Ct值在标准曲线的位置得到未知样品中目标序列的初始拷贝浓度的方法。采用SAP技术（单碱基差异原则）设计门...
