ICS65.020.30B43团体标准T/SDAA017－2021噬菌体筛选技术规程2021－06－22发布2021－07－23实施山东省畜牧协会发布TechnicalRegulationsforPhageScreen全国团体标准信息平台IT/SDAA017-2021全国团体标准信息平台IIT/SDAA017-2021前言本标准按照GB/T1.1-2020给出的规则起草。本标准由山东省畜牧协会提出并归口。本文件起草单位：青岛农业大学，山东益生种畜禽股份有限公司，山东鲁丰集团有限公司。本文件主要起草人：张灿，尹燕博，郭龙宗，刘海燕，李忠晓。本标准为首次发布。全国团体标准信息平台3T/SDAA017-2021全国团体标准信息平台4T/SDAA017-2021噬菌体筛选技术规程1范围本文件规定了噬菌体株的生物学特征测定方法及噬菌体株筛选的方法，用于从建立的噬菌体库中筛选能够裂解目标致病菌的噬菌体。本文件适用于针对环境中的大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌，从建立的噬菌体库中筛选适宜的噬菌体株。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1噬菌体bacteriophage,phage一类能感染细菌、真菌、藻类、放线菌、支原体及螺旋体等微生物的一类病毒的总称，亦称细菌病毒。3.2噬菌斑plaque噬菌体侵染细菌，导致宿主细胞溶解死亡，在琼脂培养基生长的菌苔上形成的空斑。3.3效价titer噬菌体的浓度，即每毫升样品含噬菌体的个数。通常是在含敏感菌的平板上形成噬菌斑进行噬菌体的计数，以每毫升中含有的噬菌斑形成单位（PFU/mL）表示其效价。全国团体标准信息平台5T/SDAA017-20213.4裂解效率lysisefficiency在检测的所有细菌菌株中，对噬菌体敏感的细菌所占比例。4噬菌体生物学活性特征测定4.1噬菌体样品制备与稀释取-80℃低温冻存的噬菌体样品100μL，加入带有100μL敏感宿主菌的5mL培养液中，在37℃条件下培养4h~12h，获得噬菌体增殖液。将噬菌体增殖液置于离心管中，12000r/min离心15min，取上清液，用0.22μm滤器过滤除菌，获得噬菌体悬液。用无菌生理盐水依次将噬菌体悬液进行10倍比稀释，获得不同稀释度的噬菌体稀释液。4.2噬菌体效价测定按照附录A.4选择3个适宜稀释梯度的噬菌体稀释液样品，每个稀释梯度做三个平行，分别取100μL，加入至100μL敏...
