ICS11.220B41DB22吉林省地方标准DB22/T2921—2018禽白血病A/B/J亚群检测PCR法DetectionmethodofPCRofavianleukosisA,BandJ-subgroups2018-11-12发布2018-12-30实施吉林省市场监督管理厅发布DB22/T2921—2018I前言本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。本标准起草单位：吉林省畜牧兽医科学研究院。本标准主要起草人：曹利利、郭衍冰、董航、姚新华、苑淑贤、程荣华、邵洪泽。DB22/T2921—20181禽白血病A/B/J亚群检测PCR法1范围本标准规定了禽白血病A/B/J亚群PCR检测方法的技术要求。本标准适用于禽白血病A/B/J亚群的核酸检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试剂或材料3.1试剂3.1.1病毒基因组DNA提取试剂盒。3.1.2阳性对照，为禽白血病病毒基因组DNA，或含有上述片段的质粒标准分子DNA。3.1.3阴性对照，健康鸡血液或血清DNA。3.1.410×PCR缓冲液，见附录A.1。3.1.510mmol/LdNTPs。3.1.62U/μLTaqDNA聚合酶。3.1.7水为DEPC处理过的双重蒸馏水（ddH2O），符合GB/T6682的规定。3.1.850×TAE电泳缓冲液，见附录A.2。3.1.910mg/mL溴化乙锭（EB）溶液，见附录A.3或其他同类型可替代物。3.1.101.0%琼脂糖凝胶，见附录A.4。3.1.11上样缓冲液，见附录A.5。3.1.12标准分子量DL2000Marker。3.2材料3.2.110μL、200μL和1000μL吸头。3.2.21.5mL离心管。3.2.3无菌棉拭子。3.2.40.2mL薄壁PCR管。3.3引物引物序列、浓度及扩增长度见表1。DB22/T2921—20182表1引物序列及浓度引物引物序列使用浓度扩增长度上游引物F5′-GCCAAACGGATTTCTGCCTT-3′AR5′-AACCCAGATACCAAGGAACC-3′375bpBR5′-ACAGATGGACCAATTCTGTCTC-3′581bp下游引物JR5′-ATTGTTCCACAACACCTCTG-3′10μmol/L683bp4仪器设备4.1微量移液器，2.5μL、20μL、200μL、1000μL。4.2电子天平，感量0.1mg。4.3均质器。4.4低温高速离心机。4.5PCR扩增仪。4.6核酸电泳仪。4.7紫外凝胶成像仪。5样品5.1血液或血清样品的处理用移液器（4.1）吸取抗凝血液或血清样品500μL（3.2.1）于1.5mL的离心管（3.2.2）中，以病毒基因组DNA提取试剂盒（3.1.1）提取样本DNA，操作方法按说明书进行。5.2鸡胚尿囊液的处理用移液器吸取鸡胚尿囊液500μL于1.5mL的离心管中...
