SI中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1151.5-2003对虾杆状病毒(BP)检测方法ProtocolofdetectionforBaculoviruspenaei2003-05-28发布2003-12-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布SN/T1151.5-2003前言本标准是采用OIE的《水生动物健康手册》2000年版的检疫规程。本标准的附录A是规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。本标准主要起草人:江育林、陈莉莉、潘坤永、史秀杰。SN/T1151.5-2003对虾杆状病毒(,BP)检测方法范围本标准规定了用直接显微镜镜检和用聚合酶链式反应(PCR)技术检测对虾杆状病毒的方法。本标准适用于对虾杆状病毒的鉴定及本病的流行病学调查、诊断、检疫和监测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法(eqvISO3696:1987)GB/T18088-200。出人境动物检疫采样SN/T1151.3-2002斑节对虾杆状病毒(MBV)诊断方法试荆和材料1阳性病毒DNA:由OIE参考实验室提供或由国家质量监督检验检疫总局指定的实验室提供。2水:应符合GB/T6682-1992中一级水的规格。3Taq酶:-20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化。4dNTP:含dCTP,dGTP,dATP,dTTP各10mmol/L,5引物:有二对引物可选用。使用时浓度为40Ismol/L。其序列如下:BPIF:5'-GAT-CTGCAA-GAGGAC-AAA-CC-3'BPlR:5'-ATC-GCT-AAGCTC-TGGCAT-CC-3’扩增目的基因中的560饰片段。BP2F:5'-TGT-TCT-CAG-CCA-ATA-CAT-CG3'BP2R:5'-ATC-CTGTTT-CCA-AGC-TCT-GC-3’扩增目的基因中的580by片段。6异丙醇:分析纯，使用前预冷到一20-C.7矿物油:要求无DNA酶和RNA酶。8DNA分子量标准(Marker),9样品缓冲液:按使用说明书中规定的比例与样品混合。3段乳3.3.3.3.33.34器材和设备4.1PCR扩增仪。4.2电泳仪。4.3微量移液器及吸头。4.4紫外观察灯。4.5恒温培养箱。4.6普通冰箱和低温冰箱。4.7电动匀浆器。4.8普通显微境。4.9离心机和离心管。4.10剪刀、镊子。SN/T1151.5-20035直接光学显徽镜检查5.1原理取活的(鲜活的、濒死的或有损伤的)对虾的肝胰腺，或者用收集到的粪便样品做湿压片，观察BP在肝胰腺中形成的有特征性的三角形包涵体.52新鲜组织...
