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NYT 4143-2022 动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程 琼脂稀释法.pdfVIP免费

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NY/1、4143一20224.5.1大肠埃希菌ATCC25922:用作肠杆菌科的质控菌。4.5.2粪肠球菌ATCC29212:用作肠球菌属的质控菌。4.5.3铜绿假单胞菌ATCC27853:用作铜绿假单胞菌的质控菌。4.5.4金黄色葡萄球菌ATCC29213:用作葡萄球菌属的质控菌。4.5.5空肠弯曲杆菌ATCC33560:用作弯曲杆菌的质控菌。4.5.6肺炎链球菌ATCC49619:用作链球菌、巴氏杆菌的质控菌。4.6材料0.5麦氏单位(McFarland)标准比浊液。5仪器设备5.1pH计:测谥范围pH0�14,精度0.02pH单位。5.2恒温培养箱:(35士2)°C,(42土2)°C。5.3CO2培养箱:(35士2)°C,(42士2)°C。5.4二级生物安全柜。5.5超低温冰箱:-10·c或以下。5.6点接种仪。5.7比浊仪:精确度土0.10麦氏单位(MCF)。5.8接种针。5.9分析天平:感量0.01mg和0.01g。6操作步骤6.1抗菌药物溶液制备6.l.1储备液取抗菌药物适噩,精密称定,加水或其他适宜溶剂溶解并稀释(按照表C.1的规定执行)至浓度至少为1000µg/mL(如1280µg/mL),或为最高测试浓度的10倍以上。-70°C或以下保存,有效期半年。6.1.2工作液取储备液,用CAMHB稀释至一定浓度,再倍比稀释至测试系列浓度。工作液浓度宜覆盖敏感性折点值、质控菌质控范围等。6.2含药琼脂板的制备MH琼脂(苛氧菌的培养基见附录D)高压灭菌,冷却至45·c�so·c,加抗菌药物系列工作液适撮,混匀,倾注平板(厚度约4mm),室温凝固,即形成系列稀释浓度的含药琼脂板。当天使用;或密封后冷藏,放置时间不超过5d。6.3工作菌悬液的制备a)、b)两种方法任选其一:a)直接菌悬液法:取质控菌、测试菌单菌落,分别置于无菌生理盐水或无菌CAMHB中,用比浊仪或0.5麦氏单位标准比浊液调节菌液浓度至0.5麦氏单位(相当于1.0X108CFU/mL�2.0X108CFU/mL);b)生长法:取质控菌、测试菌单菌落,分别置于加有4mL�5mL无菌CAMHB的试管中,(35土2)°C培养3h�5h。取菌液适溢,用无菌生理盐水或无菌CAMHB调节菌液浓度至0.5麦氏单位(相当千1.OX108CFU/mL�2.OXl沪CFU/mL)。适用于菌落不易直接乳化而不能获得浓度均一菌悬液的细菌。注:工作菌悬液应在制备后15min内完成接种。6.4接种

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