ICS11.220B41备案号：56331-2017DB22吉林省地方标准DB22/T2630—2017羊传染性脓疱病毒检测环介导等温扩增（LAMP）法ThedetectionofOrfvirusbyLoop-MediatedIsothermalAmplification（LAMP）method2017-06-12发布2017-08-12实施吉林省质量技术监督局发布DB22/T2630—2017I前言本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。本标准起草单位：吉林省畜牧兽医科学研究院，吉林省动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：程荣华、邵洪泽、呼延含蓉、柴方红、卢松岩、王楠、李文东、毛文智、刘沂霖、赵欣、石春军、陆伟、何浩、孙健。DB22/T2630—20171羊传染性脓疱病毒检测环介导等温扩增（LAMP）法警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验，本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。1范围本标准规定了羊传染性脓疱病毒环介导等温扩增检测方法的操作步骤、结果判定。本标准适用于羊传染性脓疱病毒的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试剂材料3.1试剂3.1.1DNA提取试剂盒3.1.2LAMP试剂——10×BstDNA聚合酶缓冲液（200mmol/LTris-HCl，100mmol/LKCl，100mmol/L(NH4)2SO4，20mmol/LMgSO4，1%Triton-100，pH8.8，25℃）；——25mmol/LMgCl2；——10mmol/LdNTPs混合物：包括dATP、dTTP、dCTP、dGTP；——8U/μLBstDNA聚合酶；——5mol/LBetaine；——ddH2O。3.1.3其他试剂——SYBRGreenI染料。3.2特异性引物引物序列，见表1（引物浓度）。DB22/T2630—20172表1特异性引物序列引物种类引物名称核苷酸序列F35'-GACCCCGAGCTCATGGT-3'外引物B35'-GCCGCGTCTTCACCTGTA-3'FIP5'-CCTCCTTGATGATCGCGTCGT-GACGTCTCGCTAGACGCCTA-3'内引物BIP5'-GAGGTGTTCACGCTGGAGAAGC-AGTACTCGGGGTAGACCAC-3'环引物LF5'-GAGCTTCTTCATGCCGCC3'3.3阴性对照ddH2O。3.4阳性对照羊传染性脓疱病毒DNA或含目的片段的质粒。3.5耗材——PE无菌手套或乳胶手套；——Eppendorf离心管1.5mL；——PCR反应管200µL；——吸头。4仪器设备——研磨器；——振荡器；——电子天平：感量0.1g；——小型高速离心机：1000r/min-16000r/min；；——LAMP仪或水浴锅（室温...
