ICS11.CCSB4广牛传Detect2021-22041西壮传染性tionofi-04-25发壮族性鼻气nfectiou发布广西壮族自气管炎酶usbovinec壮族自治区自治炎病毒酶链反erhinotrchainrea区市场监督区毒的检反应法racheitiaction督管理局地DB检测svirus—发布45方标B45/T23巢式—Nestedp2021-0布5标准11—2021式聚合polymera05-31实准合ase实施DB45/T2311—2021II前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内家可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广西壮族自治区农业农村厅提出并宣贯。本文件由广西畜牧业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：广西壮族自治区兽医研究所。本文件主要起草人：范晴、张民秀、王盛、李小凤、李丹、万丽军、阮志华、任红玉。DB45/T2311—20211牛传染性鼻气管炎病毒的检测巢式聚合酶链反应法1范围本文件规定了巢式聚合酶链反应法检测牛传染性鼻气管炎病毒的材料准备、操作方法及结果判定。本文件适用于广西行政区域内牛传染性鼻气管炎病毒的检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T31190实验室废弃化学品收集技术规范3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1牛传染性鼻气管炎病毒infectiousbovinerhinotracheitisvirus属疱疹病毒科，水痘病毒属，基因组为双链DNA。3.2聚合酶链反应polymerasechainreaction简称PCR技术，是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。3.3巢式PCR反应nestedpolymerasechainreaction简称NestedPCR，PCR技术的一种特殊形式，在常规PCR扩增的片断内再设计一对新的引物，对常规PCR的产物进行二次PCR扩增，扩增出比常规PCR更短的产物，可显著提高其检测的敏感度。3.4引物primers与待扩增DNA片段两侧互补的一小段寡核苷酸。3.5外套引物outerprimers用于第一次PCR的引物。3.6内套引物innerprimers用于第二次PCR的引物。4缩略语下列缩略语适用于本文件。IBRV：牛传染性鼻气管炎病毒（infectiousbovinerhinotracheitisvirus）DB45/T2311—20212PCR：聚合酶链反应（polymerasechainreaction）5材料准备5.1IBRV特异性引物引物序列见附录A中的A.1.1。外套引物F1和F2扩增的目的片段为416bp，内套引物F3和F4扩增的目的片段为334bp，...
