ICS65.020.30B41备案号：江苏省地方标准DBDBDBDB32323232DB32/T1774—2011鸭H9亚型禽流感病毒与副粘病毒的检测双重RT-PCR方法MethodofMultiplexRT-PCRdetectingH9SubtypeAvianInfluenzaVirus(AIV)andDuckParamyxovirus(DPV)2011-05-06发布2011-07-06实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T1774—2011I前言为规范鸭H9亚型禽流感病毒与鸭副粘病毒双重RT-PCR分子生物学检测技术，提高两种病毒混合感染检测的灵敏度、稳定性、特异性，特制定本标准。本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准结构和编写规则》编制。本标准由江苏省农业科学院提出。本标准起草单位：江苏省农业科学院。本标准起草人：魏雪涛、李银、刘宇卓、张敬峰。DB32/T1774—20111鸭H9亚型禽流感病毒与副粘病毒的检测双重RT-PCR方法1范围本标准规范了鸭H9亚型禽流感病毒与副粘病毒分子生物学检测技术RT-PCR的所用引物大小、所涉及的样品范围、操作流程、反应条件等技术标准。本标准适用于鸭H9亚型禽流感病毒与副粘病毒单独或者混合感染的实验室诊断、临床诊断、流行病学调查、分离毒株的鉴定，适用于鸭组织、分泌物、排泄物和鸭胚尿囊液中H9亚型禽流感病毒和副粘病毒核酸的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法NY/T541-2002动物疫病实验室检验采样方法NY/T772-2004禽流感病毒RT-PCR试验方法3原理聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段，可看作生物体外的特殊DNA复制。PCR技术却以其快速、敏感和特异等优点在动物疫病检测中得到广泛应用，而且随着PCR技术的不断改进，这种针对病原核酸的诊断方法表现出更准确、灵敏和特异的特点。又因为双重RT-PCR技术具备1次PCR可以鉴别诊断2种混合感染的不同病原体的独特优势，现已成为动物病原检测的重要方法之一。本标准参考了NY/T772-2004中H9AIV的检测方法，并根据GenBank上公布的鸭副粘病毒（DPV）血凝素HA基因序列的保守序列设计一对特异性引物，保证了扩增的准确性，该方法可以同时鉴定两种病毒的单一感染和混合感染。4仪器设备与主要试剂4.1仪器设备：PCR仪，离心机，电泳槽，微量移液器，凝胶成像仪4.2主要试剂：TRIZOL，氯仿，异丙醇，无水乙醇，焦碳酸二乙酯(DEPC)处理的灭...
