ICS65.120B20DB41河南省地方标准DB41/T1728—2018饲料添加剂丁酸梭菌的测定微生物法2018-11-26发布2019-02-26实施河南省质量技术监督局发布河南省地方标准公共服务平台DB41/T1728—2018前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由河南省畜牧局提出并归口。本标准起草单位:河南海瑞正检测技术有限公司、河南省兽药饲料监察所、河南省种牛遗传性能测定中心。本标准主要起草人:朱慧慧、陆静、方忠意、李灵平、周永亮、黄好强、麻晓燕、王洋洋、范晓燕、魏金销。河南省地方标准公共服务平台DB41/T1728—20181饲料添加剂丁酸梭菌的测定微生物法1范围本标准规定了饲料添加剂丁酸梭菌的检测方法微生物法。本标准适用于饲料及饲料添加剂中丁酸梭菌的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定3培养基或材料3.1亚硫酸铁琼脂培养基:见附录A中A.1。3.20.85%生理盐水:见附录A中A.2。3.3产酸指示培养基:见附录B中B.1。3.4明胶培养基。3.5淀粉水解培养基。3.6革兰氏染色配套试剂:见附录A中A.3。3.7胰蛋白胨大豆琼脂(TSW)。注：除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。水应符合GB/T6682中三级水的要求。4仪器设备4.1天平:感量0.01g。4.2粉碎机。4.3高压灭菌器。4.4恒温培养箱。4.5电热鼓风干燥箱。4.6拍击式匀质器。4.7厌氧罐（配厌氧产气袋）。4.8超净工作台。4.9移液器:100μL～1000μL。4.10显微镜。4.11酒精灯。4.12试管架。4.13灭菌试管:15mL。4.14灭菌平皿:直径90mm。河南省地方标准公共服务平台DB41/T1728—201825测定步骤5.1试样稀释及培养5.1.1无菌条件下称取试样25g(mL)样品，加入装有225mL0.85%灭菌生理盐水的匀质袋中，然后用匀质器拍打2min～3min，制成1:10的均匀稀释液。5.1.2用移液器移取1:10稀释液1mL，注入含有9mL0.85%灭菌生理盐水的试管中，充分混匀后，制成1:100的稀释液。5.1.3按上述操作方法，10倍递增稀释，如此每递增稀释一次。5.1.4选择2～3个适宜稀释度，用移液器移取1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿，同时用1mL无菌生理盐水作对照。然后将凉至50℃左右的培养基注入平皿中，小心转动培养基使试样与培养基充分混匀。5.1.5待培养基凝固后迅速将平皿倒置于培养箱中，37℃厌...
