中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２６７６—２０１０进出口粮谷中犜２毒素的检测方法酶联免疫吸附法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犜２犻狀犮犲狉犲犪犾狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犈狀狕狔犿犲犾犻狀犽犲犱犻犿犿狌狀狅狊狅狉犫犲狀狋犪狊狊犪狔２０１０１１０１发布２０１１０５０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局。本标准主要起草人：孙静克、鲍蕾、张艺兵、吕宁、吴振兴、金莹、田娟、许艳丽。Ⅰ犛犖／犜２６７６—２０１０进出口粮谷中犜２毒素的检测方法酶联免疫吸附法１范围本标准规定了进出口粮谷中Ｔ２毒素的酶联免疫吸附检测方法。本标准适用于大麦、小麦、高粱、玉米中Ｔ２毒素的检测。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法３方法提要本方法的测定是基于竞争性酶联免疫反应，用甲醇／水振荡提取粉碎样品中的Ｔ２毒素。处理后样品中的Ｔ２毒素与Ｔ２毒素酶标记物竞争结合至包被在微孔板上的抗体。通过洗涤除去微孔上未结合的Ｔ２毒素与Ｔ２毒素酶标记物，然后加入反应底物，用酶标仪测定吸光度，根据吸光度值得出试样中的Ｔ２毒素含量。４试剂和材料除注明外，所用化学试剂均为分析纯，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。４．１Ｔ２毒素检测试剂盒（参见附录Ａ）。４．２甲醇。４．３甲醇水提取液：用甲醇和水以７∶３的比例配制成提取液备用。４．４Ｔ２毒素标准品：纯度大于等于９８％。４．５Ｔ２毒素标准品溶液的配制：用乙腈作为溶剂配制成２００μｇ／ｍＬ的储备液，于－４℃条件下保存。４．６ｐＨ值为７．２的样品稀释用磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ缓冲液）：分别称取０．５５ｇ磷酸二氢钠（ＮａＨ２ＰＯ４·Ｈ２Ｏ），２．８５ｇ磷酸氢二钠（Ｎａ２ＨＰＯ４·２Ｈ２Ｏ）和９ｇ氯化钠，用水溶解并定容至１Ｌ。如果毒素含量较高，需要更高倍稀释时（大于１∶７），应向此缓冲液中加入１０％的甲醇溶液，以保证甲醇溶液的浓度为１０％。５仪器和设备５．１天平：感量０．０１ｇ。５．２均...
