GB/T17999.5-1999前言酶联免疫吸附试验(ELISA)是国外监测SPF鸡淋巴白血病病毒感染的通用方法。我国建立的淋巴白血病ELISA方法敏感性高、特异性强、重复性好，已广泛用于商品种鸡场淋巴白血病的净化和SPF鸡场淋巴白血病病毒感染的监测，本标准在此基础上，规定了SPF鸡酶联免疫吸附试验。SPFA鸟微生物学质量控制国家系列标准，包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检测方法。本标准为((SPF鸡酶联免疫吸附试验》。SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分:GB/T17999.1--1999SPF鸡红细胞凝集抑制试验;GB/T17999.2-1999SPF鸡血清中和试验;GB/T17999.3-1999SPF鸡血清平板凝集试验;GB/T17999.4-1999SPF鸡琼脂扩散试验;GB/T17999.6一1999SPF鸡胚敏感试验;GB/T17999.7-1999SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验;GB/T17999.8-1999SPF鸡试管凝集试验;GB/T17999.9-1999SPF鸡间接免疫荧光试验。本标准由中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出。本标准由农业部畜牧兽医司归口。本标准起草单位:农业部实验动物研究中心。本标准主要起草人:陈德威、张冰、赵立红、黄进、李军。中华人民共和国国家标准SPF鸡酶联免疫吸附试验GB/T17999.5一1999SPFchicken--Enzyme-linkedimmunosorbentassay1范围本标准规定了酶联免疫吸附试验所用试剂、材料，操作程序及结果判定等。本标准适用于SPF鸡感染淋巴白血病病毒后的群特异性抗原的监测。2原理检测SPF鸡蛋清中禽白血病病毒主要群特异性抗原P27的方法为双抗体夹心酶联免疫吸附试验。先用抗P27抗体包被酶标板，然后与蛋清作用，蛋清中的P27与包被抗体结合，洗去未结合的物质。再加入HRP兔杭P27抗体，作用后洗去未结合的酶标物加入底物溶液，出现颜色变化。颜色变化的速度及程度与样品中P27的含量有关3试剂和器材3.1试剂3-1门包被抗体(兔抗P27IgG),11.2RH性抗原(P27)。3门.3阴性抗原。3.1.4被检蛋清。3.1.5HRP-兔杭P27o3.1.6包被液:。.05mot/IpH9.6碳酸盐缓冲液配制碳酸钠1.59g,碳酸氢钠2.93g,蒸馏水加至1000MI3.1.7洗涤液:pH7.4,PBS-TWeen20配制,0.01m0I/I_,PH7.4PBS1000mL，吐温-20。.3MI3,1.8底物溶液:pH5.。磷酸盐一柠檬酸缓冲液一OPD-H,O,配制。.2mol/I磷酸氢二钠溶液25.7mI0.1mot/I柠檬酸溶液24.3ml，蒸馏水50MI，邻苯二胺(OPD)40mg,30%H,0,0.15mlI，.9终止液:2mol/I硫酸。3.2器材3.2.1酶标板。3.2.2移液器。12.3恒温培养箱。3.2.4FIASA读数仪4操作程序4.1抗体包被用包被液将免杭P271gG作适当稀释，每孔100pL,4C过夜。国家质量...
