中华人民共和国国家标准饲料中色氨酸测定方法分光光度法GB/T15400一94Determinationoftryptophaninfeedstuffs-Spectrophotometry1主题内容与适用范围本标准规定了测定饲料中色氨酸的原理和方法。本标准适用于配合饲料、混合饲料、浓缩饲料和单一饲料。2引用标准GB6433饲料粗脂肪测定方法3原理饲料中蛋白质经碱水解后，降解成多肤和游离的氨基酸，在酸性介质中，氧化剂存在下，色氦酸U91环与对二甲氨基苯甲醛反应生成蓝色化合物，在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。4试剂除注明者外均为分析纯。水为蒸馏水。4.1硫酸(GB625)溶液、c(1/2H2SO4)=21.2mot/L垦取589ml硫酸徐徐加入约350mL水中，冷却后用水稀释至1L.4.21%对二甲氨基苯甲醛溶液:1.0g对二甲氨基苯甲醛溶于21.2mot/L硫酸(4.1)中并定容100mL,4.30.2%亚硝酸钠(GB633)溶液(m/V),4.4lo/氢氧化钾(GB2306)溶液(m/V)4.Sl,色氨酸，色谱纯。4.61,色氨酸标准溶液:准确称取25.0mgL一色氨酸于小烧杯中，加少量0.1MOl/I氢氧化钾溶液使之溶解，定量地转移到250ml棕色容量瓶中，用水定容，浓度为100pg/mL注:本标准溶液4℃冰箱中保存，一个月内使用，浓度不变.5仪器、设备分析天平:感量。.1mg,分光光度计。离心机:转速4000r/min,实验室用粉碎机51525354国家技术监督局1994一12一30批准1995一07一01实施GB/T15400一94培养箱。容觉瓶:25ml-,50mL,250mL,10in[-具塞试管。刻度吸管:。.5mL,2ml-5mL,25ml。试样的制备‘︺八匕7口OU乐乐55.66.1选取有代表性的试样，按四分法缩分至200g，粉碎，全部通过。.25mm孔径筛(6。目)6.2按GB6433脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风干后，混匀，装入密封容器内备用。了分析步骤了门皿作曲线的绘制7.1.1吸取色氨酸浓度为100pg/mL的标准溶液(4.6)5.00,7.50,10.00,12.50,15.00,17.50mL分别置于25ml,棕色容量瓶中用水定容，摇匀。溶液浓度分别为20,30,40,50,60,70pg/m工一。7.1.2吸取各浓度溶液(7.1.1)1mL，分置具塞试管(5.7)中，空白管加1mL水。向每支试管内加入氢氧化钾溶液(4.4)1ml，混匀，将试管放入冷水盆中，加5mL对二甲氨基苯甲醛溶液(4.2).从冷水盆中取出试管，摇匀，在室温(20-30'C，下同)放置30min,7.1.3向上述每支试管内加。.2mL亚硝酸钠溶液(4.3)，摇匀，室温放置25min,7.1.4以空白管调零，在590nm波长下，以1cm光径测定各溶液吸光度值。7.1.5以色氨酸浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制工作曲线，或列出回归方程式7.2样品测定7.2.1称样:按附表A建议的称样量称取...
