中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T5224—20192019-12-27发布2020-07-01实施中华人民共和国海关总署发布ICS07.100.30X04出口食品中单核细胞增生李斯特菌检验方法——实时荧光PCR内标法DetectionofListeriamonocytogenesinfoodforexport—Real-timePCRwithinternalamplificationcontrolmethodISN/T5224—2019前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则进行起草。本标准由中华人民共和国海关总署会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国杭州海关、上海交通大学、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：李可、施春雷、王娉、史贤明、方莹、张晓峰、崔妍。1SN/T5224—2019出口食品中单核细胞增生李斯特菌检验方法—实时荧光PCR内标法1范围本标准规定了出口食品中单核细胞增生李斯特菌的实时荧光PCR内标方法。本标准适用于出口食品中单核细胞增生李斯特菌的快速检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4789.30-2016食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3定义、术语和缩略语下列定义、术语和缩略语适用于本文件。3.1定义和术语3.1.1扩增内标internalamplificationcontrol，IAC扩增内标（）是指添加到PCR反应体系中用以指示假阴性现象的一段人工构建DNA序列或者是一段致病菌的看家基因序列。主要原理是：在荧光定量PCR中使用与目的基因相似的扩增内标，它的两端引物结合序列与目的基因完全一致，但具有不同的探针结合序列，使之不能与目的基因的探针结合，只能与内标探针结合。将扩增内标添加到PCR反应体系中，使之与目标基因序列共同进行扩增，如果在反应体系中存在一些抑制因素，则扩增内标和目标序列的扩增都将受到抑制，从而达到指示PCR反应假阴性的目的。3.1.2Ct值cyclethresholdCt每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。3.2缩略语PCR（polymerasechainreaction）：聚合酶链反应。DNA（deoxyibonuleicacid）：脱氧核糖核酸。FAM（6-carboxyfluorescein）：6-羧基荧光素。HEX（6-hexachlorofluorescein）：6-羧基-2'，4，4'，5'，7，7'-六氯荧光素琥珀酰亚胺酯。2SN/T5224—20194方法提要荧光PCR反应体系中，预先加入能同时...
