SNT 5220-2019 出口食品中3-氯丙醇酯及缩水甘油酯的测定 气相色谱-质谱法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 52202019出口食品中 3-氯丙醇酯及缩水甘油酯 的测定 气相色谱-质谱法Determination of 3-chloropropanol esters（3-MCPDE）and glycidol esters（GE）in food products for export Gas chromatography mass spectrometry method2019-12-27 发布2020-07-01 实施中 华 人 民 共 和 国 海 关 总 署发 布ICS 67.050X 04ISN/T 52202019前 言本标准按照 GB/T 1.12009 和 GB/T 20001.4-2015 的规则编写。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广州海关。本标准主要起草人：刘青、曾广丰、王志元、庞世琦、陈文锐、邹志飞、韦晓群、康文昱、黄瑾、张洋子。1SN/T 52202019出口食品中 3-氯丙醇酯及缩水甘油酯的测定 气相色谱-质谱法1范围本标准规定了出口食品中 3-氯丙醇酯和缩水甘油酯气相色谱-质谱测定方法。本标准适用于食用油、奶粉、油炸膨化食品及焙烤类食品中 3-氯丙醇酯和缩水甘油酯的定性检测和定量检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。3方法原理本标准通过水解反应将食品中存在的各种 3-氯丙醇酯（3-MCPDE）和缩水甘油酯（GE）全部转化为 3-氯丙醇（3-MCPD），经苯基硼酸（PBA）衍生化后，用气相色谱-质谱法测定其含量，并以其表示 3-MCPDE 的总量。方法通过在水解反应终点分别加入氯化钠-冰乙酸溶液（含氯的终止反应液，提供氯元素，使缩水甘油完全转化为 3-MCPD）和硫酸钠-冰乙酸溶液（不含氯的终止反应液，无法使缩水甘油转化为3-MCPD）进行对照试验，衍生化后分别测得 3-MCPDE 与 GE 的总量和 3-MCPDE 的实际含量，利用差减法从而得到 GE 的含量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯。水采用 GB/T 6682 规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。4.2冰乙酸：色谱纯。4.3甲醇钠。4.4无水硫酸钠。4.5氯化钠。4.6丙酮：色谱纯。4.7苯基硼酸。4.8叔丁基甲醚：色谱纯。4.9乙酸乙酯：色谱纯。4.10正己烷：色谱纯。4.11异辛烷：色谱纯。4.120.5 mol/L 甲醇钠-甲醇溶液：称取固体甲醇钠（4.3）2.701g 于 100 mL 容量瓶中，以甲醇（4.1）2SN/T 52202019定容至 100 mL，混匀。4.1310%硫酸钠-乙酸溶液：称取无水硫酸钠固体（4.4）10 g，溶于 100 mL 水中，再向溶液中加入4 mL 冰乙酸（4.2）。4.1420%氯化钠-乙酸溶液：称取氯化钠固体（4.5）20 g，溶于 100 mL 水中，再向溶液中加入 4 mL冰乙酸（4.2）。4.15丙酮-水溶液（19:1，V/V）：量取 190 mL 丙酮（4.6）和 10 mL 水，混匀。4.16苯基硼酸（PBA）溶液：称取 2.5 g 苯基硼酸（4.7）溶于 20 ml 丙酮-水（19:1，V/V）（4.15），混匀。4.17叔丁基甲醚-乙酸乙酯溶液（8:2，V/V）：量取 80 mL 叔丁基甲醚（4.8）和 20 mL 乙酸乙酯（4.9），混匀。4.18标准物质：棕榈酸-3-氯丙二醇酯（3-MCPDE-Palimtate，CAS 号 51930-97-3，分子量 587.36），和棕榈酸缩水甘油酯（Glycidyl Palmitate，CAS 号 7501-44-2，分子量 312.49），纯度均大于 98。4.19内标物：棕榈酸-d5-3-氯丙二醇酯（d5-3-MCPDE-Palimtate，CAS 号 1185057-55-9，分子量592.39），纯度大于 98。4.20标准储备液：分别准确称取 25.0 mg 的标准物质（精确到 0.001g），用叔丁基甲醚-乙酸乙酯溶液（4.17）溶解后定容至 50.0 mL 刻度，配制成浓度为 500 mg/L 的标准储备溶液，于 0 4 冰箱内储存，有效期 12 个月。4.21混合标准储备溶液：分别准确吸取 10.6 mL 棕榈酸-3-氯丙二醇酯，5.65 mL 棕榈酸缩水甘油酯标准储备液（4.20）于 50 mL 容量瓶中，用叔丁基甲醚-乙酸乙酯溶液（4.17）定容至刻度，配制成浓度为 20.0 mg/L（以 3-氯丙醇计）的混合标准储备溶液，于 0 4 冰箱内储存，有效期 6 个月。4.22内标溶液：准确称取 1.00 mg 的内标物质（精确到 0.001g），用叔丁基甲醚-乙酸乙酯溶液（4.17）溶解后定容至 50.0 mL 刻度，配制成浓度为 20.0 mg/L 的内标溶液，于 0 4 冰箱内储存，有效期 12个月。4.23微孔滤膜：0.22 m，有机相型。5仪器和设备5.1气相色谱-质谱联用仪（GC-MS），配电子轰击源（EI 源）。5.2涡旋混合器。5.3超声波水浴。5.4冷冻离心机：15，10 000 r/min。5.4氮吹浓缩仪。5.5水浴恒温振荡器。5.6分析天平：感量 0.001 g。6测定步骤6.1样品制备6.1.1提取6.1.1.1奶粉样品称取 2 g（精确至 0.001 g）试样于 50 mL 具塞聚四氟乙烯离心管中（每个样品需要两份作对照），加入 2.0 mL 去离子水，准确加入 50 L 的 20.0 mg/L 内标溶液（4.22），再加入 5 mL 正己烷（4.10），超声提取 15 min，以不低于 10 000 r/min，离心 10 min。取出后，移取上清液于新的 50 mL 离心管中，3SN/T 52202019重复提取 1 次 2 次，合并提取液。置于氮吹浓缩仪中，于 40-50下用氮气吹至提取液剩余 5 mL作为待反应液。6.1.1.2油炸膨化类食品样品称取颗粒或粉末状试样 2 g（精确至 0.001 g）于 50 mL 具塞聚四氟乙烯离心管中（每个样品需要两份作对照），加入 2.0 mL 去离子水，准确加入 50 L 的 20.0 mg/L 内标物溶液（4.22），再加入 5mL正己烷（4.10），超声提取 15 min，以不低于 10 000 r/min，离心 10 min。取出后，移取上清液于新的50 mL 离心管中，重复提取 1 次 2 次，合并提取液。置于氮吹浓缩仪中，于 40 50下用氮气吹至提取液剩余 5 mL 作为待反应液。6.1.1.3食用油样品称取0.5 g（精确至0.001 g）油样品于15 mL具塞聚四氟乙烯离心管中（每个样品需要两份作对照），准确加入 50 L 的 20.0 mg/L 内标物溶液（4.22），再加入 2 mL 叔丁基甲醚-乙酸乙酯溶液（4.17），将离心管置于超声波清洗器于 45下，超声混合提取 15 min，作为待反应液。6.1.1.4焙烤类食品样品称取颗粒状试样 2 g（精确至 0.001 g）于 50 mL 具塞聚四氟乙烯离心管中（每个样品需要两份作对照），加入 2.0 mL 去离子水，准确加入 50 L 的 20.0 mg/L 内标物溶液（4.22），再加入 5 mL 正己烷（4.10），超声提取 15 min，以不低于 10 000 r/min，离心 10 min。取出后，移取上清液于新的 50 mL 离心管中，重复提取 1 次 2 次，合并提取液。置于氮吹浓缩仪中，于 40 50下用氮气吹至提取液剩余 5 mL 作为待反应液。6.1.2水解反应在 6.1 的待反应液中加入 1 mL 叔丁基甲醚-乙酸乙酯溶液（食用油无需加入该溶液），再向离心管中加入 0.5 mL 甲醇钠-甲醇溶液（4.12）进行水解反应，严格控制反应时间，7 min 后，向每一组对照样品中分别加入 3 mL 10%硫酸钠-乙酸溶液（4.13）、3 mL 20%氯化钠-乙酸溶液（4.14），充分振荡，使水解反应及时终止。再加入 3 mL 正己烷进行脱脂，充分混匀后静置，待水相有机相分层明显后，吸取上层弃去，脱脂操作进行两遍。6.1.3衍生化反应脱脂后，向各离心管中加入 0.2 mL PBA 溶液（4.16），振荡混匀后，置于水浴恒温振荡器中，于70环境衍生反应 20 min。衍生后，离心管冷却至室温，加入 5 mL 乙酸乙酯涡旋提取两遍，合并两次提取液于 40下用氮气吹干，残留物用 1.00 mL 异辛烷（4.11）定容，充分涡旋混合过有机膜后，滤液作为待测样液供 GC-MS 分析。6.2测定6.2.1测定条件 气相色谱-质谱测定的参考条件如下：a)离子源：电子轰击源（EI 源）b)色谱柱：DB-5ms 毛细管柱（30.0 m0.25 mm0.25 m），或相当者；c)程序升温：60保持 1min，以 5/min 的速率升温至 180，再以 30/min 的速率升温至280，保持 2min；d)进样口温度：280；4SN/T 52202019e)GC-MS 接口温度：280；f)进样量：1 L；g)监测方式：选择离子扫描模式（SIM 模式）；3-MCPD-DBA：m/z196、147*、91d5-3-MCPD-DBA：m/z 201、150*、93h)溶剂延迟：4min。6.2.2气相色谱-质谱测定按照上述测定条件，分别对混合标准工作溶液和样品试液进行检测，以保留时间和离子丰度比对样品进行定性，标准曲线內标法对样品进行定量。3-MCPD-PBA 的参考保留时间为 19.344 min，d5-3-MCPD-PBA 的参考保留时间为 19.289 min。典型的色谱图参见附录 A 中的图 A.1。3-MCPDE 衍生物和 d5-3-MCPDE 衍生物典型的质谱图分别见附录 A 中的图 A.2 和图 A.3。6.3标准曲线的绘制用适量体积的叔丁基甲醚-乙酸乙酯溶液（4.17）将混合标准储备溶液（4.21）稀释（每个标准品需要两份作对照），配置成浓度分别为 0.0200 mg/L、0.200 mg/L、0.500 mg/L、1.00mg/L、2.00 mg/L的混合标准工作溶液，经过 6.1.2 和 6.1.3 的处理步骤后，得到 3-MCPDE 测定曲线和 3-MCPDE、GE总量测定曲线。按照 6.2 的测定条件浓度由低到高进样测定，以目标物定量离子峰面积/内标物定量离子峰面积-目标物浓度作图，得到标准曲线及回归方程，参见附录 B。7结果计算和表述7.13-MCPDE 的含量试样中 3-MCPDE 的含量(以 3-MCPD 计)由色谱数据处理软件或按式（1）计算获得。1000mV CX11=（1）式中：X1 试样中 3-MCPDE 的含量，单位为微克每千克（g/kg)；*为定量离子C1 从标准曲线求得的试样溶液中 3-MCPDE 的含量，单位为毫克每升（mg/L)；V 试样最终的定容体积，单位为毫升（mL)；m 试样的称样质量，单位为克（g)。计算结果保留三位有效数字。7.2GE 的含量试样中 GE 的含量(以 3-MCPD 计)由色谱数据处理软件或按式（2）计算获得。12X-1000mV CX=（2）式中：X 2 试样中 GE 的含量，单位为微克每千克（g/kg）；C 从标准曲线求得的试样溶液中 3-MCPDE 和 GE 的总含量，单位为毫克每升（mg/L)；V 试样最终的定容体积，单位为毫升（mL）；5SN/T 52202019m 试样的取样质量，单位为克（g）；X1 试样中 3-MCPDE 的含量，单位为微克每千克（g/kg）；计算结果保留三位有效数字。8定量限本标准的定量限：奶粉样品的定量限为 25.