中华人民共和国国家标准谷类籽粒赖氨酸测定法染料结合赖氮酸(DBL)法UDC口8.1:848。862GB4881一.4Methodfordeterminationoflysineincerealgrains-Dy，一bindinglysinemethod本标准适用于测定水稻、玉米、高粱、麦类等谷类籽粒的赖氨酸含量。1原理在pH2左右缓冲体系中，样品蛋白质的碱性氨基酸(赖氨酸、组氨酸、精氨酸)可与偶氮磺酸染料酸性橙12等摩尔结合，生成不溶性络合物，其染料结合量(摩尔数)相当于此三种碱性氨基酸的总和。若另取一份样品，先用丙酸醉将蛋白质中赖氨酸的￡一氨基掩蔽(丙酞化作用)，使之失去与染料结合的能力，然后再与染料反应，所得染料结合垦只是组氨酸和精氨酸之和。根据两次染料结合量的差值，便可算出该样品中的赖氨酸含量。2仪器、设备2.1分析天平:感量0.4-9.2.2实验室用粉碎机。2.8GXD一201型蛋白质分析仪或GXDL一202型蛋白质赖氨酸分析仪主机。2.4实验室用电动往复振荡机。2.5离心、机:300。一4ooor/min,2.630一35ml具塞玻璃管或聚乙烯管。2.7定量加液器或移液管:20.2、0.2-1.2.8容量瓶:1000.l00ml。3试剂试剂除注明者外均为分析纯。3.1草酸一乙酸一磷酸盐缓冲溶液:3.46磷酸二氢钾和209草酸(执C20,.2H20)分别溶于热水后，全部转移到1000-1容量瓶中。再加人1.7-185%磷酸，60m]冰乙酸，1ml丙酸，冷却至室温，用蒸馏水定容。3.23.89-M酸性橙12(AcidOrange12，缩写成^O一12，分子式为C18Hll04N2SNa，生化试剂，层析纯，含量不少于90%)染料溶液，准确称取1.3636酸性橙12(纯度按100%计)，溶解于热的缓冲溶液后，再定量转移到1000-1容量瓶中，冷却至室温，用缓冲溶液定容。3.316%和8%(W/V)乙酸钠溶液:称取16.09和8.09乙酸钠(按无水乙酸钠计)，配成loom,溶液。3.4丙酸醉:化学纯。4标准曲线的绘制配制1.20,1.30,1.40,1.50,1.60,1.70,1.80mM酸性橙12染料标准系列溶液，在GXD国家标准局1984一12一20发布1985一10一01实施GB4801一84201型蛋白质分析仪上侧定透光率(为提高灵敏度，用连续档测定。即以40-13.89mM染料溶液加25ml缓冲溶液，调透光率为。;40m13.89MM染料溶液加125m1缓冲溶液，调透光率为87),然后以透光率(%)为纵坐标，染料浓度(mm)为横坐标，在半对数座标纸上绘制标准曲线。或将透光率换算为吸光度，计算回归方程。若用GXDL一202型蛋白质赖氨酸分析仪，则可直接读出吸光度，然后以吸光度E为纵坐标，染料浓度(mM)为横坐标，在普通坐标纸上绘制标准曲线，或计算回归方程。5测定步骤5.1试样的选取与制备选取有代表性谷类籽...
