中华人民共和国国家标准食物中烟酸的测定方法GB/T12395—90Methodfordeterminationofniacininfoods━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━1主题内容与适用范围本标准规定了用微生物方法测定食物中的烟酸含量。本标准适用于各类食物中烟酸的测定。2原理某一种微生物的生长,必需某些维生素,例如L.arabinosus17-5之生长需要烟酸,培养基中若缺乏这种维生素该细菌便不能生长。在一定条件下,该细菌生长的情况,以及它的代谢物乳酸的浓度是与培养基中该维生素含量成正比的,因此可以用酸度或浑浊度的测定法来测定样品中烟酸的含量。本方法检出限为10ng。3试剂本实验所用之水均需蒸馏水。所用试剂均需分析纯。3.1甲苯。3.2盐酸:3mol/L溶液。3.3盐酸:1:5(V/V)溶液。3.4硫酸:0.5mol/L溶液。于2000mL的烧杯中先注入700mL水,将28mL硫酸沿烧杯壁慢慢倒入水中,用水稀释至1000ml。3.5冰乙酸:0.02mol/L溶液。3.6氢氧化钠:40％溶液。溶200g氢氧化钠于水中,稀释至500mL。3.7氢氧化钠:0.1mol/L溶液。溶4g氢氧化钠于水中,稀释至1000mL。3.8乙醇:25％(V/V)溶液。3.9酪蛋白:不含维生素。3.9.1不含维生素酪蛋白的制备3.9.1.1乙醇处理法:称取100g酪蛋白细粉于烧瓶中,加入300mL95％乙醇,在水浴中加热回流1h,减压抽滤,弃去滤液,再加入乙醇回流,如此反复3～4次,至滤液呈微黄色或无色,取出在烘箱内70～80℃干燥即可。3.9.1.2酸洗法:称取250g酪蛋白,置于5L容器中,慢慢加入3.6L水以防止成块,加入浓盐酸2.77mL,搅拌浸泡3min。用虹吸管除去上层清液。加入3.6L水,再加入浓盐酸2.77mL,如此反复8次后,再加水3.6L,加入55.5mL12mol/L氨水,放置过夜,使酪蛋白溶解成浆状。用布过滤,于滤液中慢慢加入约50mL3mol/L盐酸,调至pH4.5,使酪蛋白全部沉淀,过滤。弃去滤液,用50～60℃热水冲洗数次,挤压去水,放入烤箱内于100℃烤干即可。3.10酸解酪蛋白:称取50g不含维生素的酪蛋白于500mL烧杯中,加200mL3mol/L盐酸,于压力蒸汽消毒器内10.3×14**4Pa(151b/in**2)压力下水解6h。将水解物转移至蒸发皿内,在沸水浴上蒸发至膏状。加200mL水使之溶解后再蒸发至膏状,如此反复3次,以除去盐酸。注意每次蒸发时不可蒸干或使之焦糊,因为蒸到这样程度,水解液所含营养物已被破坏。用40％氢氧化钠调节pH至3.5,以溴酚蓝作外指示剂。加20g活性炭,振摇,过滤。如果滤液不呈淡黄色或无色,可用活性炭重复处理。滤液加水稀释至500mL,加少许甲苯于冰箱中保存。3.11胱氨酸、色氨酸溶液...
