第38卷第2期大连海洋大学学报Vol．38No．22023年4月JOUＲNALOFDALIANOCEANUNIVEＲSITYApr．2023DOI:10．16535/j．cnki．dlhyxb．2022-191文章编号:2095-1388(2023)02-0275-09尼罗罗非鱼跨膜Bax抑制剂母体6基因Tmbim6的克隆、表达及功能鉴定巫祎琴，陈福暖，张志强，江栢坚，简纪常，黄瑜*(广东海洋大学水产学院，广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室，广东湛江524088)摘要:为了解跨膜Bax抑制剂母体6(transmembraneBaxinhibitormotifcontaining6，TMBIM6)在尼罗罗非鱼(Oreochromisniloticus)病原体感染中的作用，利用聚合酶链式反应(PCＲ)对Tmbim6基因进行克隆与鉴定，并采用实时荧光定量PCＲ(qPCＲ)分析Tmbim6在健康尼罗罗非鱼(体质量为80～100g)的组织分布模式及无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)、PolyI:C模拟病毒刺激后的表达变化。结果表明:尼罗罗非鱼Tmbim6开放阅读框为714bp，可编码237个氨基酸，包含6个跨膜结构域和1个C-末端基序;亚细胞定位显示，尼罗罗非鱼TMBIM6定位于细胞质，双荧光素酶报告基因系统检测发现，Tmbim6在HEK-293T细胞中过表达后极显著抑制NF-κB通路(P＜0.01);qPCＲ分析显示，Tmbim6基因在所检测的组织中广泛分布，在肝脏和肌肉中的表达量最高;经无乳链球菌感染和PolyI:C刺激后，Tmbim6在肝脏、脾脏、头肾、脑和肠道中的表达水平均显著上调(P＜0.05)。研究表明，尼罗罗非鱼TMBIM6参与了无乳链球菌感染和PolyI:C刺激后的细胞应激过程及免疫反应。关键词:尼罗罗非鱼;Tmbim6;亚细胞定位;NF-κB;基因表达中图分类号:S917.4文献标志码:A细胞凋亡又称细胞程序性死亡，是在真核生物中进化的一种常见的生理过程，目的是去除多余的、受感染的或受损的细胞，以维持内环境动态平衡［1］，在细胞发育、衰老、伤口愈合和清除病原体等生理活动中起着关键作用［2］。研究者现已阐明了多种导致细胞凋亡的途径，如线粒体依赖(内部)、线粒体非依赖性(外部)和内质网(EＲ)介导的途径［3］等。跨膜Bax抑制剂母体6(transmembraneBaxin-hibitormotifcontaining6，TMBIM6)，又称Bax抑制剂-1(Baxinhibitor-1，BI-1)，1994年在成年大鼠睾丸的cDNA文库筛选时被首次发现，并命名为Tegt(testisenhancedgeneexpression)，随后于1998年在酵母中被鉴定为是一种抗凋亡蛋白，可以抑制Bax的促凋亡作用［4］。TMBIM6主要定位在内质网膜和核外膜，含有6～7个跨膜结构域，主要功能是保护细胞免受内质网应激诱导的细胞凋亡［5］。内质网是细胞内钙离子...
