·8·食品科技FOODSCIENCEANDTECHNOLOGY生物工程2023年第48卷第04期收稿日期：2022-11-09*通信作者基金项目：山东省泰山产业领军人才项目(LJNY201702)；2020年山东省博士后创新项目(202003038)。作者简介：隋旭(1997—)，男，山东泰安人，硕士研究生，研究方向为农产品加工及贮藏工程。隋旭，张耸*，王庆国*(山东农业大学食品科学与工程学院，山东泰安271018)摘要：多酚氧化酶(Polyphenoloxidase，PPO)是导致马铃薯酶促褐变的关键酶，探究马铃薯酶促褐变过程中与PPO存在互作的蛋白质至关重要。通过采取构建StPOT32原核表达载体，利用His标签纯化树脂进行纯化并获得纯度较高的StPOT32蛋白的方法，以纯化得到的马铃薯StPOT32为抗原制备了抗体，然后通过免疫沉淀-质谱联用技术分析了可能与PPO存在相互作用的蛋白质。质谱结果表明，大量蛋白被StPOT32抗体富集，共富集到2种蛋白酶、60种蛋白酶抑制子、18种氧化应激蛋白、28种防御蛋白作为与PPO互作的候选蛋白。这些候选蛋白中包括已被证明可以影响PPO活性的蛋白，以及与PPO存在相似生理功能的蛋白。该文章初步探究与PPO可能存在互相作用的蛋白，为阐明PPO活性的调节机制提供一定的理论基础。关键词：多酚氧化酶；互作蛋白；免疫沉淀-质谱联用；酶促褐变中图分类号：TS201.2文献标志码：A文章编号：1005-9989(2023)04-0008-09ScreeningofPolyphenolOxidaseInteractingProteinsinPotatoTuberSUIXu,ZHANGSong*,WANGQingguo*(CollegeofFoodScienceandEngineering,ShandongAgriculturalUniversity,Tai’an271018,China)Abstract:Polyphenoloxidase(PPO)isthekeyenzymeresponsibleforenzymaticbrowningofpotato.ForinvestigatingtheproteinsthatinteractedwithPPOduringenzymaticbrowningofpotato,theStPOT32prokaryoticexpressionvectorwasconstructed.ThenStPOT32waspurifiedusingHis-tagresin.Anti-StPOT32waspreparedusingprokaryoticexpressionofStPOT32,andthenproteinsthatmayinteractwithPPOwereanalysedbyimmunoprecipitation-massspectrometry.ThemassspectrometryresultsshowedthatalargenumberofproteinswereenrichedbytheStPOT32antibody.2proteases,60proteaseinhibitors,18oxidativestressproteins,and28defenceproteinswereenrichedascandidateproteinsforinteractionwithPPO.ThesecandidatesincludeproteinsthathavebeenshowntoaffectPPOactivityandproteinsthathavesimilarphysiologicalfun...
