乙肝六项的操作、本卷须知及检验结果的解释第一页，共三十五页。乙肝六项操作HBSAg(双抗体夹心法〕•原理•在微孔条上预包被，被纯化的乙肝外表抗体，配以酶标记抗体〔HBsAb-HRP〕及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清〔或血浆〕中乙肝外表抗原〔HBsAg〕。第二页，共三十五页。乙肝六项操作HBSAg(双抗体夹心法〕•操作步骤•一.准备•1.1平衡：将试剂盒各组分别取出，平衡至室温〔18-25℃〕，•1.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀〔如有晶体应充分溶解〕，•浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按25倍稀释后使用。•1.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。第三页，共三十五页。乙肝六项操作HBSAg(双抗体夹心法)–二.HBSAg操作–2.1加样：分别用加样器在对照孔中参加阴、阳性对照血清各75l于相应孔中。–2.2温育：置37℃温育60分钟。–2.3加酶：不用洗涤，分别在每孔中参加酶标记抗体50l，轻轻混匀。–2.4温育：置37℃温育30分钟，室温平衡5分钟。–2.5洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干〔每次应保持30-60秒的浸泡时间〕。–2.6显色：每孔参加底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处30分钟。–2.7终止：每孔加终止液50l，混匀。–三HBSAg测定第四页，共三十五页。乙肝六项操作HBSAg(双抗体夹心法)•结果判断与分析•临界值〔C.O.〕的计算：Cutoff临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.05时按实际OD值计算，小于0.05时以0.05计算。•结果判定：样品OD值S/C.O>=1者为HBsAg阳性•样品OD值S/C.O<1者为HBsAg阴性第五页，共三十五页。乙肝六项操作HBeAb检测〔ELISA)竞争法一.试剂准备同上二.HBeAb操作加样：分别用加样器在对照孔中参加阴、阳性对照血清各50l于相加酶：分别在每孔中参加酶标记抗体50l，轻轻混匀。温育：置37℃温育30分钟，室温平衡5分钟。洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干〔每次应保持30-60显色：每孔参加底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处终止：每孔加终止液50l，混匀。三.HBeAb测定用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值〔用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录第六页，共三十五页。乙肝六项操作HBeAb检测〔ELISA)竞争法•四.结果判断与分析•临界值〔C.O.〕的计算：•临界值＝〔阴性对照孔OD值N+阳性对照孔OD值P〕×0.5，•结果判定：样品OD值S/C.O<=1者为HBeAb阳性•样品OD值S/C.O>1者为HBeAb阴性•注意：加底物显色，显色的强弱与待测标本中HBeAb的含量...
