乙肝两对半测定－酶联免疫法实习生：廖於波指导老师：李海龙第一页，共三十二页。HBV是乙型病毒性肝炎的病原体。HBV感染呈世界性流行，但不同地区感染的流行程度差异很大。据WHO报道，全球约20亿人曾感染过HBV，其中3.5亿人为慢性感染者，每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌。我国属高流行地区一般地区HBsAg阳性率为7.18%。第二页，共三十二页。乙肝病毒血清标志物HBsAg第一个出现，感染后1-2周即可阳性阳性表示存在HBV感染HBsAb出现在HBsAg消失后保护性抗体疫苗免疫成功的标志第三页，共三十二页。乙肝病毒血清标志物HBeAg病毒复制标志传染性强HBeAb传染性降低长期存在是DNA与肝细胞整合的结果第四页，共三十二页。乙肝病毒血清标志物HBcAgHBV复制的标志血清中难以检测出来IgM-HBcAb急性HBV感染IgG-HBcAb急性感染恢复期和慢性持续感染第五页，共三十二页。检测HBV病毒血清标志物是临床最常用的病原学诊断方法。HBV具有三个抗原抗体系统，即乙肝外表抗原〔HBSAg〕和乙肝外表抗体〔HBsAb〕、e抗原〔HBeAg〕和e抗体〔HBeAb〕、核心抗原〔HBcAg〕核心抗体〔HBcAb〕，由于HBcAg在血液中难于检出，故临床免疫学检测不包括HBcAg，目前常采用酶联免疫法和化学发光法检测。第六页，共三十二页。酶联免疫吸附实验原理用于检测包被于固相板孔中的待测抗原〔或抗体〕。即用酶标记抗体，并将能看出的抗原或抗体吸附在固相载体外表，使抗原抗体反响在固相载体外表进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，最后通过酶作用于底物后显色来判断结果。颜色反响的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。第七页，共三十二页。乙肝病毒血清标志物检测原理血清学标志原理包被试剂标记或结合物结果判断HBsAg夹心法HBsAbHBsAb显色(+)HBsAb夹心法HBsAgHBsAg显色(+)HBeAg夹心法HBeAbHBeAb显色(+)HBeAb竞争法HBeAbHBeAb及中和抗原不显色(+)HBcAb竞争法HBcAgHBcAb不显色(+)第八页，共三十二页。标本本要求采集：血浆：使用抗凝血浆管〔枸橼酸盐、EDTA盐、肝素之一为抗凝剂〕采集样品。样品离心别离后，提取血浆用于检测。血清：采用正确医用技术采集标本。离心别离后，提取血清样品用于检测。第九页，共三十二页。标本要求储存：样品可存放于2~8℃冰箱，24小时内测定。假设需长时间保存，那么应冻存于-20℃以下，防止反复冻融。上述样品使用前应恢复到室温，轻轻摇动混匀。假设标本有沉淀物形成，应离心除去，并确定未...
