CentralLaboratoryofBiology水体中大肠菌群的测定微生物学实验第一页，共二十页。CentralLaboratoryofBiologyCollegeofLifeSciences,HubeiNormalUniversity【课前预习】1.典型的大肠杆菌群菌落特征是什么？2.食品中大肠菌群数测定的意义是什么？第二页，共二十页。CentralLaboratoryofBiologyCollegeofLifeSciences,HubeiNormalUniversity【目的要求】1.学习和掌握大肠菌群的测定方法〔多管发酵法〕2.了解测定过程中每一步的反响原理。3.了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性第三页，共二十页。CentralLaboratoryofBiologyCollegeofLifeSciences,HubeiNormalUniversity【实验原理】•大肠菌群是一群能在37℃培养48h内发酵乳糖产酸、产气的需氧或兼氧革兰氏染色阴性无芽抱杆菌。以大肠杆菌为主，包括肠细菌属、柠檬酸细菌属、埃希氏菌属和克雷伯氏菌属等。•大肠菌群在肠道和粪便中数量非常高，且与肠道和粪便中的病原菌生活习性相近，可作为判断样品是否被人、畜粪便污染的标志。第四页，共二十页。CentralLaboratoryofBiologyCollegeofLifeSciences,HubeiNormalUniversity发酵法：又称多管发酵法或三步发酵法(此法是根据大肠菌群具有发酵乳糖产酸产气的特性，利用含乳糖的培养基培养不同稀释度的样品经初发酵、平板别离和复发酵3个检测步骤，最后根据结果查最大自然数〔mostprobablenumber〕表，算出食品中的大肠菌群数。)第五页，共二十页。CentralLaboratoryofBiologyCollegeofLifeSciences,HubeiNormalUniversity1)初发酵〔推测试验〕：将不同稀释度的水样，分别接种于含有乳糖等糖类的培养液中〔3倍或1倍乳糖培养基，视所加的水样体积和培养基体积而定〕，经37ºC培养24h，观察产酸产气情况，以初步判断是否有大肠菌群存在。第六页，共二十页。CentralLaboratoryofBiologyCollegeofLifeSciences,HubeiNormalUniversity•发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置杜氏小套管。乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。为便于观察细菌的产酸情况，培养基内加有溴甲酚紫作为pH指示剂，细菌产酸后，培养基即由原来的紫色变为黄色。溴甲酚紫还有抑制其他细菌如芽孢菌生长的作用。第七页，共二十页。CentralLaboratoryofBiologyCollegeofLifeSciences,HubeiNormalUniversity2〕平皿别离〔证实试验〕•水中除大肠菌群外，尚有其它细菌可能引起糖类发酵，因此需要进一步证实。•将初发酵管中已发酵的菌液接种于...
