流式细胞术及其科研(kēyán)应用流式细胞仪的原理(yuánlǐ)BDBiosciencesImmuneFunction流式细胞术(FlowCytometry,简称FCM)是一种可以快速、准确、客观,并且同时检测单个微粒(通常是细胞)的多项特性,并加以定量的技术,同时可以对特定群体加以分选研究对象为生物颗粒,如各种细胞、微生物及人工合成(rénɡōnɡhéchénɡ)微球等研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征,并加以定量BDBiosciencesImmuneFunction流式细胞术的特点(tèdiǎn)极短时间内可分析大量(dàliàng)细胞,只要标本中的细胞数量足够,流式细胞仪(Flowcytometer)可以每秒钟数十、数百、数千个细胞的速率进行测量,测量的细胞总数可达数千、数万乃至数百万个。可同时分析单个细胞的多种特征,当同时用多种分子探针,如用不同荧光素标记的不同单克隆抗体进行多色荧光染色,通过流式细胞分析,即可获得单细胞的多种信息,使细胞亚群的识别、计数更为准确。定性或定量分析细胞:通过荧光染色对单细胞的某些成分如DNA含量、抗原或受体表达量、Ca2+浓度、酶活性以及细胞的功能等均可进行单细胞水平的定性与定量分析强大的分选功能,在分析的同时可以对特定群体加以分选BDBiosciencesImmuneFunction(jiǎncè)细胞(xìbāo)结构细胞大小细胞粒度细胞表面面积核浆比例DNA含量与细胞周期RNA含量蛋白质含量细胞功能细胞表面/胞浆/核的特异性抗原(kàngyuán)细胞活性细胞内细胞因子酶活性激素结合位点细胞受体BDBiosciencesImmuneFunction当前(dāngqián)流式细胞分析发展趋势从相对(xiāngduì)细胞计数到绝对细胞计数从相对定量到绝对定量分析从单色到多色荧光分析从细胞膜成分到细胞内成分分析从细胞分析到可溶性成分的流式细胞分析BDBiosciencesImmuneFunction(xìnhào)RightAngleLightDetectorCellComplexitySSCForwardLightDetectorCellSurfaceAreaFSCIncidentLightSource前向角散射光(FSC,ForwardScatter)细胞相对大小(dàxiǎo)及其表面积侧向角散射光(SSC,SideScatter)细胞粒度及细胞内相对复杂性LaserFALSSensorBDBiosciencesImmuneFunction外周全血细胞散射光双参数(cānshù)点图(红细胞溶解后)BDBiosciencesImmuneFunction(jiǎncè)荧光信号•使用荧光标记的单克隆抗体染色,做多色分析•荧光信号的强弱(qiánɡruò),反映了细胞抗原的表达含量BDBiosciencesImmuneFunction(yíngguāng)双色直接(zh...