研究报告２０２３年第４９卷第８期（总第４７６期）１ＤＯＩ：１０．１３９９５／ｊ．ｃｎｋｉ．１１－１８０２／ｔｓ．０３３１５８引用格式：侯英婕，杨豪，黄文章，等．基于代谢途径改造谷氨酸棒杆菌生产Ｌ⁃缬氨酸［Ｊ］．食品与发酵工业，２０２３，４９（８）：１－６．ＨＯＵＹｉｎｇｊｉｅ，ＹＡＮＧＨａｏ，ＨＵＡＮＧＷｅｎｚｈａｎｇ，ｅｔａｌ．ＭｅｔａｂｏｌｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｇｌｕｔａｍｉｃｕｍｆｏｒＬ⁃ｖａｌｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＦｏｏｄａｎｄＦｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，２０２３，４９（８）：１－６．基于代谢途径改造谷氨酸棒杆菌生产Ｌ⁃缬氨酸侯英婕１，２，杨豪１，２，黄文章１，２，徐建中１，２∗，张伟国１，２∗１（江南大学生物工程学院，江苏无锡，２１４１２２）２（工业生物技术教育部重点实验室（江南大学），江苏无锡，２１４１２２）摘要Ｌ⁃缬氨酸是一种重要的支链氨基酸，随着市场对其需求量的不断提升，进一步提高Ｌ⁃缬氨酸的产量和糖酸转化率具有重要意义。在该研究中，使用实验室保藏的谷氨酸棒杆菌ＶＨＬ⁃１作为出发菌株，通过对Ｌ⁃缬氨酸合成路径进行代谢改造显著提高了Ｌ⁃缬氨酸的产量和丙酮酸前体物的供应。首先，通过敲除ｌｄｈ（编码乳酸脱氢酶）、ｐｏｘＢ（编码丙酮酸氧化酶）、ｐｙｃ（编码丙酮酸羧化酶）基因以及弱化ａｌａＴ（编码丙氨酸转氨酶）基因表达来实现丙酮酸的富集。其次，通过强启动子Ｐｔｕｆ替换ｉｌｖＢＮＣ操纵子原始启动子并增加ｉｌｖＢＮ（编码乙酰羟酸合酶）基因拷贝数来增强丙酮酸向Ｌ⁃缬氨酸合成的碳代谢流。最后，通过过表达支链氨基酸转运蛋白编码基因ｂｒｎＦＥ和调节蛋白编码基因ｌｒｐ增强Ｌ⁃缬氨酸胞外输出效率。最终构建的重组菌株ＶＨＬ⁃９在５Ｌ生物反应器中进行补料分批培养，Ｌ⁃缬氨酸产量可到达（８２．５±５．６）ｇ／Ｌ，生产强度为１．１５ｇ／（Ｌ·ｈ），糖酸转化率为０．３０２ｇ／ｇ葡萄糖。关键词Ｌ⁃缬氨酸；谷氨酸棒杆菌；代谢工程；丙酮酸；发酵第一作者：硕士研究生（张伟国教授和徐建中副教授为共同通信作者，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｗｇ＠ｊｉａｎｇｎａｎ．ｅｄｕ．ｃｎ；ｘｕｊｚ１２６＠１２６．ｃｏｍ）基金项目：国家重点研发计划项目（２０２１ＹＦＣ２１００９００）收稿日期：２０２２⁃０８⁃０１，改回日期...
