流式细胞术(FlowCytometry,FCM)作者(zuòzhě):笛风第一页,共八十一页。基本概念第二页,共八十一页。流式细胞仪结构(jiégòu)•激光光源及光束形成系统第三页,共八十一页。流式免疫(miǎnyì)分型技术要点标本的获取和运输(yùnshū)第四页,共八十一页。FCM的主要测定(cèdìng)指标FSC,SSC,FL1,FL2,FL3(FL4)第五页,共八十一页。FCM标记(biāojì)方法单标:第六页,共八十一页。荧光(yíngguāng)素种类FITC(异硫氰酸荧光素):绿色530nm第七页,共八十一页。PE最强,适用于弱表达抗原(kàngyuán)抗体(kàngtǐ)的选择第八页,共八十一页。数据(shùjù)显示方式单参数(cānshù)直方图第九页,共八十一页。流式常见(chánɡjiàn)图形(HistogramPlot)第十页,共八十一页。流式细胞的主要(zhǔyào)信息:Fluorescence最常用的标记方法(fāngfǎ)是荧光素分子标记的抗体与细胞抗原结合第十一页,共八十一页。流式常见(chánɡjiàn)图形(HistogramPlot)适用于:单参数(cānshù)分析第十二页,共八十一页。流式常见(chánɡjiàn)图形(DotPlot)适用(shìyòng)于:多参数分析第十三页,共八十一页。第二节流式细胞术的科研(kēyán)应用第十四页,共八十一页。流式应用常见(chánɡjiàn)范围细胞(xìbāo)大小第十五页,共八十一页。抗体(kàngtǐ)标记的方法第十六页,共八十一页。抗体(kàngtǐ)的选择首选直接标记抗体第十七页,共八十一页。实验对照(duìzhào)的设计第十八页,共八十一页。空白对照和阴性(yīnxìng)对照的比较:第十九页,共八十一页。实验(shíyàn)标本的处理单细胞悬液的制备:胰酶消化第二十页,共八十一页。流式检测应用(yìngyòng)实例第二十一页,共八十一页。凋亡检测(jiǎncè)-每一步都有检测(jiǎncè)试剂盒第二十二页,共八十一页。细胞周期G1MG2SQuiescentcellsG0第二十三页,共八十一页。(qūfēn)Sub-G0/G1peaks---PIstaining第二十四页,共八十一页。Caspases第二十五页,共八十一页。AnnexinVAssay建议用于悬浮(xuánfú)细胞第二十六页,共八十一页。AnnexinVAssay能够区分死亡(sǐwáng)与凋亡第二十七页,共八十一页。流式“TUNEL”第二十八页,共八十一页。第二十九页,共八十一页。第三十页,共八十一页。IntracellularCytokine-Protocol第三十一页,共八十一页。第三十二页,共八十一页。SORTING(细胞(xìbāo)分选)第三十三页,共八十一页。DIMERXantigenspecificTcellas...