蛋白质浓度测定方法第一页，共三十五页。四种古老的经典方法：定氮法双缩尿法〔Biuret法〕Folin－酚试剂法〔Lowry法〕紫外吸收法新的测定法：考马斯亮蓝法〔Bradford法〕更新的测定方法：BCA法第二页，共三十五页。分光光度计的使用第三页，共三十五页。原理光线的本质是电磁波的一种，有不同的波长。肉眼可见的彩色光称为可见光，波长范围在400～750nm：小于400nm的光线称为紫外光；大于750nm的光线称为红外光。第四页，共三十五页。依据Lambert-Beer〔朗伯－比尔〕定律，一束单色光通过溶液后，光波被吸收一局部，其吸收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比。当入射光、吸收系数K和溶液的光径长度L不变时，吸光度A与溶液的浓度C成正比。具体测量时，第五页，共三十五页。补充知识第六页，共三十五页。７２１型可见分光光度计第七页，共三十五页。第八页，共三十五页。紫外分光光度计第九页，共三十五页。微量凯氏〔Kjeldahl〕定氮法第十页，共三十五页。原理样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨〔消化〕，氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。第十一页，共三十五页。以甘氨酸为例，其反响式如下：NH2CH2COOH+3H2SO4==2CO2+3SO2+4H2O+NH3(1)2NH3+H2SO4==(NH4)2SO4(2)(NH4)2SO4+2NaOH==2H2O+Na2SO4+2NH3(3)反响〔1〕、(2)在凯氏瓶内完成，反响〔3〕在凯氏蒸馏装置中进行。为了加速消化，可以参加CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定那么用强酸。第十二页，共三十五页。器材1.100ml凯氏烧瓶2.改进型凯氏定氮仪3.50ml容量瓶4.分析天平〔电子天平〕5.烘箱6.电炉7.酒精灯8.小玻璃珠9.滴定管10.洗瓶11.锥形瓶12.铁架台第十三页，共三十五页。试剂1.消化液：30%H2O2∶浓H2SO4H2O=321∶∶∶2.30%NaOH溶液3.2%H3BO3溶液4.混合催化剂〔粉末K2SO4-CuSO4混合物〕K2SO4与CuSO4以31∶比例充分研细混匀。5.0.01mol/L标准盐酸溶液6.混合指示剂〔田氏指氏剂〕取0.1%甲烯蓝-无水乙醇溶液50ml、0.1%甲基红-无水乙醇溶液200ml，混合，贮于棕色瓶中备用。该指示剂酸性时为紫红色，碱性时为绿色，变色范围很窄〔pH5.2～5.6〕且很灵敏。7.蒸馏水第十四页，共三十五页。假设测定的样品含氮局部只是蛋白质，那么样品中蛋白质含量〔%〕=总氮量×6.25假设样品中除有蛋白质外，尚含有其他含氮物质，那么需向样品中参加三氯乙酸，然后测定未加三...
