实验七-1细胞荧光染色观察(guānchá)与荧光显微镜的使用（示范：细胞形态观察与暗视野显微镜的使用）第一页，共三十一页。实验(shíyàn)目的与教学要求1.掌握荧光(yíngguāng)显微镜的成像基本原理及其使用；2.掌握暗视野显微镜的成像基本原理及其使用。第二页，共三十一页。荧光显微镜是一种较为常用的的光学显微镜，其基本原理是利用一定波长的激发光对样品进行激发，使之产生一定波长的荧光，从而用于对样品结构或其组分进行定性(dìngxìng)、定位、定量观察检测。一、荧光(yíngguāng)显微镜的成像原理第三页，共三十一页。什么(shénme)是荧光?物质中的电子吸收光的能量(néngliàng)由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光。即：物质吸收短波光，发射出的长波光。第四页，共三十一页。保持固有的荧光(yíngguāng)特性荧光波长＞激发波长荧光强度极小于激发光的强度有不同程度的衰减荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率荧光(yíngguāng)的性质第五页，共三十一页。优点：检出能力高对细胞的刺激小能进行多重染色用途：物体构造的观察荧光的有无、色调比较进行物质判别发荧光量的测定(cèdìng)对物质定性、定量分析荧光(yíngguāng)显微镜的优点和用途第六页，共三十一页。第七页，共三十一页。荧光素激发波长发射波长DAPI372456AMCA350450Hoechst33258365465FITC490520AcridineOrange490590AcridineYellow470550CY3552565TRITC541572PropidiumIodide530615荧光荧光(yíngguāng)(yíngguāng)素的特性素的特性第八页，共三十一页。1.对细胞结构或组分的定性、定位、半定量研究。2.作为生物大分子筛选(shāixuǎn)与鉴定的标记物。荧光(yíngguāng)显微镜技术在生命科学研究中的应用第九页，共三十一页。第十页，共三十一页。二、暗视野显微镜的成像原理(yuánlǐ)通过特殊的暗视野聚光器，使照明光线改变途径，不直接进入物镜，而是倾斜地照射到样品(yàngpǐn)上，由样品(yàngpǐn)表面的绕射光线入射到物镜内，产生样品(yàngpǐn)的衍射图象。第十一页，共三十一页。三、试剂(shìjì)与器材青蛙、洋葱、人正常肝组织切片和脂肪肝组织切片（HE染色）甲醇、1‰丫啶橙、滤纸(lǜzhǐ)、吸管、载玻片荧光显微镜、暗视野显微镜、普通光学显微镜第十二页，共三十一页。四、实验(shíyàn)内容和实验(shíyàn)步骤1.蛙血细胞染色观察：取少许蛙血→常规血涂片→凉干→甲醇固定...
