第三章细胞工程基本(jīběn)技术第一页,共七十二页。第一页,共七十二页。一、细胞工程实验室的设置1动物细胞工程实验室的设置无菌操作室:更衣间、缓冲(huǎnchōng)间、操作间培养观察室制备室储藏室清洗与灭菌室第二页,共七十二页。第二页,共七十二页。2植物细胞工程实验室的设置除与动物细胞工程实验室相同的设置外,还有些特殊要求,如光照(guāngzhào)、试管苗培育和移植驯化等。第三页,共七十二页。第三页,共七十二页。二、常用(chánɡyònɡ)仪器与设备超净工作台倒置显微镜和相差显微镜干燥箱水纯化装置冰箱(4℃、-20℃、-70℃)压力(yālì)蒸汽消毒器第四页,共七十二页。第四页,共七十二页。细胞记数板和电子(diànzǐ)细胞记数仪过滤除菌装置离心机移液管、吸管离心管移液器天平第五页,共七十二页。第五页,共七十二页。动物细胞工程(gōngchéng)实验室基本设备仪器1培养箱二氧化碳(èryǎnghuàtàn)培养箱,提供恒定CO2(5%)以稳定pH值,温度:哺乳类35-3℃7℃,鸟类38.5℃,气相:O2、CO2、pH7.2-7.42显微(xiǎnwēi)操作仪3细胞融合仪第六页,共七十二页。第六页,共七十二页。5培养(péiyǎng)用器皿各种培养瓶、培养皿、多孔培养板(6、24、96)6手术器械等第七页,共七十二页。第七页,共七十二页。植物(zhíwù)细胞工程实验室基本设备仪器光照培养箱人工气候(qìhòu)室摇床培养瓶第八页,共七十二页。第八页,共七十二页。三、实验室的生物(shēngwù)安全根据密封程度的不同,将生物安全分为四个等级,即:P1、P2、P3、P4(protect)一般细胞培养按一级生物安全标准,其基本要求是:1、限制随便出入实验室;2、操作前后要消毒;3、不能用口吸取液体;4、禁止在室内进食、吸烟和存放食品(shípǐn);5、操作时着专门实验服;6、处理细胞前后要洗手;7、操作时在超净工作台。第九页,共七十二页。第九页,共七十二页。四、培养用品的清洗在培养物中无毒和无菌是保证培养细胞生存的首要条件,因此对培养器皿的清洗和灭菌是极为重要的环节。清洗的目的是清除杂质和微生物,使器皿内不残留任何影响细胞生长(shēngzhǎng)的成分(有害物质、微生物、细胞碎片及非营养性化学成分)。第十页,共七十二页。第十页,共七十二页。第十一页,共七十二页。第十一页,共七十二页。1、玻璃用品的清洗(qīngxǐ)在细胞培养中,工作量最大的是玻璃器皿的清洗。清洗后的玻璃器皿不仅要求干净透明、无油迹,而...