农药(nóngyào)残留的酶抑制法与免疫测定技术第一页，共十六页。6.1酶抑制分析测定法1951年,Giang与Hall应用有机磷和氨基甲酸酯农药在体外对胆碱酯酶具有抑制作用的机理来测定其含量.1968年Mendoza利用(lìyòng)薄层-酶抑制技术测定10种有机磷和氨基甲酸酯农药,最小检出量可达纳克水平.1975年Kramer与Gamson用一种与靛酚乙酸酯相似的化合物,测定1~10μg的各种有机磷酸酯化合物,与此同时,Zweig等也测定了甲萘威等农药.进入20世纪80年代,人们开始以来源丰富,取材和制备都十分方便的植物酶源,建立薄层-植物酯酶抑制方法,为酶抑制法的进一步推广和应用创造了条件.第二页，共十六页。6.1.2酶法检测原理有机磷和氨基甲酸酯类农药对参与神经生理传递过程的乙酰胆碱酯酶AChE具有抑制作用,使该酶的分解作用不能正常进行,从而导致底物乙酰胆碱的积累,影响动物正常的神经传导,引起中毒(zhòngdú)或死亡.可将这一昆虫毒理学原理应用到农药残留检测中,如果农产品样品提取液中不含有或含有很低的有机磷或氨基甲酸酯类农药,酶的活性就不被抑制,试样中加入的基质就被酶水解,或少部分水解,水解产物与加入的显色剂反应产生颜色;反之,如果试样提取液中含有一定量的有机磷或氨基甲酸酯类农药,酶的活性就被抑制,试样中加入的基质就不被酶水解,从而不显色或颜色很浅,用分光光度计测定吸光度值,计算出抑制率,就可判断出样品中农药残留情况.第三页，共十六页。6.1.3酶源选择与提取酶源选择是生物酶技术应用的基础,其性质的好坏,特异性大小,稳定与否直接关系到检测的结果.在酶抑制检测的技术中,既有应用AChE的,也有应用非特异性酯酶的,其来源既有动物的,也有植物的.6.1.4底物和显色剂酶抑制剂显色反应(fǎnyìng)可使用的底物和显色剂很多,大致可分为以下几类:第四页，共十六页。(1)乙酰胆碱-溴百里酚蓝显色;(2)乙酸-β-萘酯-固蓝B盐显色反应;(3)乙酸羟基吲哚显色法;(4)乙酸靛酯显色法;6.1.5检测方法(1)比色法:我国农业部农药(nóngyào)检定所利用酶抑制产生的显色反应,通过分光光度计比色测定酶的抑制率,以测定有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量.第五页，共十六页。(2)酶片法:酶片即为浸渍有胆碱酯酶或其他敏感酶类的滤纸或类似载体物质.(3)固相酶速测技术6.2免疫检测技术免疫分析概述当细菌、病毒和有害物等病原入侵时,能产生抵御外来物的抗体，这就是动物的免疫反应(fǎnyìng)，致病的外来物称为抗原。免疫分析是以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的分析技术...
