第十四章免疫细胞的别离及其外表标志检测技术第一页，共三十二页。第二页，共三十二页。免疫细胞的别离•外周血单个核细胞别离•淋巴细胞的别离•T细胞和B细胞的别离•T细胞亚群的别离第三页，共三十二页。外周血单个核细胞别离•外周血单个核细胞〔peripheralmononuclearcells,PMNC〕包括淋巴细胞和单核细胞〔monocyte〕。•Ficoll别离液法主要用于别离外周血中的单个核细胞，是一种单次差速密度梯度离心的别离法。第四页，共三十二页。细胞分选和根本原理不同细胞密度不同不同细胞外表生物学特性不同不同细胞外表分化抗原不同第五页，共三十二页。不同细胞密度不同人的红细胞密度为1.093粒细胞密度为1.092单个核细胞〔淋巴细胞和单核细胞〕的密度为1.076-1.090第六页，共三十二页。不同细胞密度不同第七页，共三十二页。用1.077±0.001的分层液可将细胞别离第八页，共三十二页。密度梯度离心(Ficoll)离心第九页，共三十二页。淋巴细胞别离〔去单核细胞〕贴壁粘附法吸附柱过滤法磁铁吸引法Percoll别离液法〔连续密度梯度离心〕第十页，共三十二页。•E花环沉降法•尼龙毛柱别离法T细胞和B细胞的别离T细胞亚群的别离•亲和板结合别离法•磁性微球别离法•荧光激活细胞别离仪别离法第十一页，共三十二页。细胞外表分化抗原〔CD抗原〕适用于T、B细胞的别离能看出CD抗原细胞亚群的别离未知CD抗原细胞亚群的别离〔阴性分选〕第十二页，共三十二页。第十三页，共三十二页。磁珠大小可以选择第十四页，共三十二页。大小免疫磁珠别离细胞的特点比较比较项目大磁珠小磁珠对细胞的影响对细胞造成机械压力，影响其生物学活性，不利于分离后培养。对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养。对流式细胞仪的影响阻塞流式细胞仪的喷嘴，影响散射光。可直接上流式细胞仪检测，不影响散射光。分离条件要求技术简单，分离可在试管中完成。需要很强的磁场来分离细胞。收率得率高。得率不高。纯度纯度低。纯度高。分离时间分离速度快。分离速度慢。分离成本成本低。需要很强的磁场来分离细胞，需要一次性的分离柱，不能在普通试管进行。第十五页，共三十二页。第十六页，共三十二页。第十七页，共三十二页。免疫磁珠法细胞分选过程第十八页，共三十二页。免疫磁珠细胞分选装置第十九页，共三十二页。全自动细胞分选系统第二十页，共三十二页。荧光激活细胞别离仪别离法第二十一页，共三十二页。流式细胞分析仪第二十二页，共三十二页。淋巴...
