课题2土壤中分解尿素的细菌的别离与计数第一页,共三十页。一、课题背景1、尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。2、细菌利用尿素的原因CO(NH2)脲酶+CO2NH3+H2O第二页,共三十页。课题目的①从土壤中别离出能够分解尿素的细菌②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌第三页,共三十页。1、实例:原因:因为热泉温度70~800C,淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。PCR,此项技术要求使用耐高温〔930C〕的DNA聚合酶。㈠.筛选菌株筛选原理:人为提供有利于目的菌株生长的条件,同时抑制或阻止其他微生物生长。第四页,共三十页。不加有机碳源不加氮源2.选择培养基的制作方法自养微生物酵母菌和霉菌固氮微生物参加青霉素加高浓度食盐金黄色葡萄球菌第五页,共三十页。15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43.土壤中分解尿素的细菌的别离与计数所需培养基:①从物理性质看此培养基属于哪类?固体培养基第六页,共三十页。②在此培养基中哪些作为碳源、氮源?碳源:葡萄糖、尿素氮源:尿素培养基的氮源为尿素,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素,缺乏氮源而不能生长发育繁殖,而受到抑制,所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。4、培养基选择分解尿素的微生物的原理第七页,共三十页。如当石油是唯一碳源时,可抑制不能利用石油的微生物的生长,使能够利用石油的微生物生存,从而别离出能消除石油污染的微生物。筛选能够分解石油的微生物?第八页,共三十页。1.使用选择培养基的目的是〔〕A.培养细菌B.培养真菌C.使需要的微生物大量繁殖D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是()A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素实践训练CD第九页,共三十页。5、怎样证明此培养基具有选择性呢?以尿素为唯一氮源的培养基牛肉膏蛋白胨培养基是别离尿素细菌判断该培养基有无选择性实验组对照组培养基类型是否接种目的结果只生长尿素细菌生长多种微生物是第十页,共三十页。微生物的培养与观察第十一页,共三十页。鉴定:在以尿素为唯一氮源的培养基中参加酚红指示剂。培养某种细菌后,如果PH升高,指示剂将变红,说明该细菌能够分解尿素。测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后,将滤膜放到伊红美蓝培养基上培养,大肠杆菌菌落呈现黑色,通...