核农学报2023，37（5）：0955~0961JournalofNuclearAgriculturalSciences甘薯曲叶病毒PCR-层析试纸条快速检测方法的建立张小梅*李广录刘宇侯文邦（河南科技大学，河南洛阳471000）摘要：为了能够快速且同时大批量检测甘薯样本是否感染甘薯曲叶病毒（SPLCV），本研究建立了SPLCVcp基因的PCR-层析试纸条快速检测方法。首先，本研究构建SPLCVcp基因的重组质粒作为阳性对照，并对标记的特异性引物的扩增条件进行优化。结果显示，退火温度为57℃时，特异性扩增效果最佳；特异性检测结果表明，该引物对与甘薯无症状1号病毒（SPSMV-1）、甘薯杆状DNA病毒B（SPBV-B）、甘薯羽状斑驳病毒（SPFMV）、甘薯褪绿矮化病毒（SPCSV）和甘薯潜隐病毒（SPLV）均无交叉反应，表明该引物对具有较高的特异性。其次，本研究构建了PCR-层析试纸条快速检测系统，当抗体包被磁粒时，20µg地高辛单克隆抗体为0.1mg羧基磁粒的最佳抗体标记量。特异性扩增产物在新构建的层析系统中3min左右进行可视化检测；灵敏度检测结果表明，该层析系统的最低检测限为0.0001ng·µL-1基因组DNA，灵敏度是普通凝胶检测的10倍，说明该系统灵敏度较高。综上，本研究建立的PCR-层析试纸条检测系统具有可视性、灵敏度高、简便快速的特点，且可以同时对大批量的样本进行SPLCV检验，满足了脱毒薯苗上市前检测量大的需求。关键词：甘薯；甘薯曲叶病毒；PCR-层析试纸条；灵敏性DOI：10.11869/j.issn.1000-8551.2023.05.0955甘薯（IpomoeabatatasLam.）具有耐贫瘠、抗干旱、产出多等优点，被誉为世界第七大重要作物［1］。我国是世界上最大的甘薯生产国，常年种植面积约600万公顷，据联合国粮食及农业组织（FoodandAgricultureOrganizationoftheUnitedNations，FAO）统计，2018年我国大陆甘薯的种植面积约占世界甘薯种植面积的29.39％，产量约占世界总产量的57.65％［2-4］。由于甘薯含有极其丰富的营养物质，且随着人们生活水平的提高，饮食结构趋于多元化、保健化，鲜食型甘薯的市场供应比例不断增长［5-7］。但是甘薯在种植过程中极易受病毒病的影响，甘薯病毒的侵染会对甘薯的产量和品质产生很大危害，更是引起甘薯品种退化的主要原因［8-10］。其中甘薯曲叶病毒（sweetpotatoleafcurlvirus，SPLCV）是侵染甘薯的主要DNA病毒之一，目前在我国普遍存在，被该病毒侵染的甘薯会表现出叶片黄化、叶脉变黄明脉增厚、叶片往上卷曲、叶片出现斑驳等症状［11-12］。SPLCV的侵染对不同品种的甘薯造成的产量损...
