论著·基础研究ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－８３４８．２０２３．０９．００４网络首发ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／５０．１０９７．Ｒ．２０２３０４１４．１７５６．００５．ｈｔｍｌ（２０２３－０４－１７）ＰＫＣ通过调控ＴＲＰＣ／Ｃａ２＋通道影响ｉＰＳ－ｍｐＭＳＣ－ｆｂｓ分化为功能性胰岛β细胞的机制研究＊郭鹏１，谭烨１，李文婧２，丁钧１△（重庆医科大学附属第三医院：１．肝胆胰外科；２．消化内科，重庆４０１１２０）［摘要］目的探讨影响诱导性多能干细胞－间充质样－成纤维细胞（ｉＰＳ－ｍｐＭＳＣ－ｆｂｓ）分化为功能性胰岛β细胞的分子机制。方法从健康成年小鼠胰腺中分离纯化间充质样－成纤维细胞（ｍｐＭＳＣ－ｆｂｓ），通过慢病毒将Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、ｃ－Ｍｙｃ和Ｋｌｆ４４种转录因子转染至ｍｐＭＳＣ－ｆｂｓ，诱导ｍｐＭＳＣ－ｆｂｓ转变为诱导性多能干性球体细胞（ｉＰＳ－ｍｐＭＳＣ－ｆｂｓ），并通过免疫荧光染色实验和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测其是否表达瞬时受体离子电位通道蛋白（ＴＲＰＣｓ）；分别将蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）激动剂佛波醇酯（ＰＭＡ）和拮抗剂（Ｂｉｓ－１）与ｉＰＳ－ｍｐＭＳＣ－ｆｂｓ共孵育，通过荧光影像系统测定细胞内游离钙离子（Ｃａ２＋）水平，观察ＰＫＣ对ｉＰＳ－ｍｐＭＳＣ－ｆｂｓＴＲＰＣ／Ｃａ２＋通道的调节关系。结果从成年小鼠胰腺中成功分离纯化ｍｐＭＳＣ－ｆｂｓ，该细胞群与骨髓来源的间充质干细胞（ＭＳＣｓ）有相似表面标志物（ＣＤ９０、ＣＤ１０５和ＣＤ１４６），并成功将ｍｐＭＳＣ－ｆｂｓ诱导为ｉＰＳ－ｍｐＭＳＣ－ｆｂｓ，且诱导后细胞表达ＴＲＰＣｓ（ＴＲＰＣ１、ＴＲＰＣ３和ＴＲＰＣ４）。ｉＰＳ－ｍｐＭＳＣ－ｆｂｓ与ＰＫＣ激动剂ＰＭＡ共孵育后，使用磷脂酶Ｃ（ＰＬＣ）／Ｄｉａｃ途径刺激可见细胞内Ｃａ２＋未出现第２高峰；而与ＰＫＣ抑制剂（Ｂｉｓ－１）共孵育后，使用ＰＬＣ／Ｄｉａｃ途径刺激细胞内Ｃａ２＋出现第２高峰。结论ＰＫＣ可负性调控ＴＲＰＣ／Ｃａ２＋通道，从而影响ｉＰＳ－ｍｐＭＳＣ－ｆｂｓ分化为功能性胰岛β细胞。［关键词］１型糖尿病；多能干细胞；转录因子；间充质干细胞；成纤维细胞；蛋白激酶；胰岛β细胞［中图法分类号］Ｒ３２９．２［文献标识码］Ａ［文章编号］１６７１－８３４８（２０２３）０９－１２９８－０５Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｔｕｄ...
