2022年医学专题—尿液蛋白质检验一.ppt

病例(bngl)患者(hunzh)，男，68岁，因浮肿、无尿入院。入院前因上呼吸道感染多次使用庆大霉素和复方新诺明而出现浮肿，尿量进行性减少。体格检查：眼睑浮肿，双下肢可凹性水肿。1.初步诊断为什么疾病？2.要明确诊断需要哪些进一步的实验室检查？急性(jxng)肾小管坏死第一页，共四十九页。尿液蛋白质检验(jinyn)Urine Protein Analysis黄 辉第二页，共四十九页。3 3教学(jio xu)目标了解(lioji)蛋白尿的定义一一理解蛋白尿形成的原因(yunyn)和机制二二掌握尿液蛋白质检查的检测原理、方法学评价、质量保证及临床意义三三第三页，共四十九页。4 4教学内容蛋白尿的定义一一蛋白尿形成的原因(yunyn)和机制二二尿液蛋白质的检验(jinyn)三三尿液蛋白质检验(jinyn)的临床意义四四第四页，共四十九页。5 5一、蛋白尿的定义(dngy)肾小球的滤过(l u)肾小管与集合(jh)管的重吸收肾小管的分泌正常人尿液中蛋白质的含量很少！第五页，共四十九页。6 6一、蛋白尿的定义(dngy)健康人尿液蛋白质含量很少，当尿液蛋白 质 超 过150mg24h-1或 超 过100mgL-1时,蛋白质定性试验为阳 性(yngxng)称为蛋白尿(proteinuria)。第六页，共四十九页。7 7二、蛋白尿形成的原因(yunyn)和机制肾性蛋白尿renal proteinuria肾小球性蛋白尿glomerular proteinuria混 合 性 蛋 白 尿mixed proteinuria肾小管性蛋白尿tubular proteinuria第七页，共四十九页。8 8二、蛋白尿形成(xngchng)的原因和机制肾前性蛋白尿prerenal proteinuria溢出(y ch)性蛋白尿overflow proteinuria第八页，共四十九页。9 9二、蛋白尿形成的原因(yunyn)和机制肾后性蛋白尿postrenal proteinuria组织性蛋白尿histic proteinuria第九页，共四十九页。1010二、蛋白尿形成(xngchng)的原因和机制肾小球性蛋白尿：蛋白尿的选择性选择性蛋白尿：肾小球损伤程度(chngd)较轻，以分子量49万中相对分子量的白蛋白为主。非选择性蛋白尿：肾小球损伤(snshng)程度较重，尿液中大分子量蛋白质和中分子量蛋白质同时存在。第十页，共四十九页。1111二、蛋白尿形成的原因(yunyn)和机制蛋白尿种类病变部位尿液蛋白质特点肾小球性蛋白尿肾小管性蛋白尿混合性蛋白尿溢出性蛋白尿组织性蛋白尿第十一页，共四十九页。1212二、蛋白尿形成(xngchng)的原因和机制蛋白尿种类病变部位尿液蛋白质特点肾小球性蛋白尿肾小球中分子量蛋白、大分子量蛋白质增加肾小管性蛋白尿肾小管小分子量蛋白质增加为主混合性蛋白尿 肾小球、肾小管肾小球、肾小管受损程度不同而有一定的差异溢出性蛋白尿肾前性小分子量蛋白质组织性蛋白尿肾小管、泌尿组织T-H蛋白质增加为主第十二页，共四十九页。1313三、尿液蛋白质的检验(jinyn)尿液中有无(yu w)蛋白质？尿液中蛋白质的量？尿液中有哪一类(y li)蛋白质？第十三页，共四十九页。1414三、尿液蛋白质的检验(jinyn)蛋白质理化(lhu)性质蛋白质的两性(lingxng)电离和等电点蛋白质的变性蛋白质的沉淀蛋白质的呈色反应第十四页，共四十九页。1515尿液蛋白质定性(dng xng)加热(ji r)乙酸法磺基水杨酸法干化学(huxu)试带法三、尿液蛋白质的检验第十五页，共四十九页。1616三、尿液蛋白质的检验(jinyn)尿液蛋白质定性(dng xng)：加热乙酸法蛋白质加热加热(ji r)蛋白质变性蛋白质沉淀稀乙酸稀乙酸第十六页，共四十九页。1717三、尿液蛋白质的检验(jinyn)尿液蛋白质定性：加热(ji r)乙酸法u方法经典而准确，为蛋白定性确证实验(shyn)；u特异性强，干扰因素少；u灵敏度较低，为150mg/L；upH值、盐离子浓度对实验结果的影响。第十七页，共四十九页。1818三、尿液蛋白质的检验(jinyn)尿液蛋白质定性(dng xng)：磺基水杨酸法蛋白质酸性酸性(sun xn)条件条件氨基酸阳离子蛋白盐沉淀磺酸根离子磺酸根离子第十八页，共四十九页。1919三、尿液蛋白质的检验(jinyn)尿液蛋白质定性(dng xng)：磺基水杨酸法u操作简便、反应(fnyng)灵敏、结果显示快；u检测灵敏度高，为50mg/L；u造影剂、青霉素钾盐等可以造成假阳性。第十九页，共四十九页。2020三、尿液蛋白质的检验(jinyn)尿液蛋白质定性(dng xng)：干化学试带法蛋白质酸碱指示剂复合物+酸碱指示剂电离(dinl)发生颜色改变第二十页，共四十九页。尼龙(nlng)膜层：防止大分子物质对反应污染。碘酸盐层：破坏维生素C等干扰(gnro)物质。试剂(shj)层：与尿中所检测化学物质发生反应。支持层：塑料片，起支持作用。试带组成尿液蛋白质的检验第二十一页，共四十九页。尿干化学分析仪工作(gngzu)原理示意图机械系统光学系统电路系统第二十二页，共四十九页。2323三、尿液蛋白质的检验(jinyn)尿液蛋白质定性(dng xng)：干化学试带法u操作简便、快速、易于标准化；u对球蛋白(dnbi)、本周蛋白(dnbi)的敏感度低；u不同类型试带灵敏度有一定的区别，在70100mg/L。第二十三页，共四十九页。2424三、尿液蛋白质的检验(jinyn)?如何(rh)选择这些定性方法？尿液蛋白质定性(dng xng)第二十四页，共四十九页。2525三、尿液蛋白质的检验(jinyn)尿液蛋白质定性(dng xng)实验方法操作性灵敏度实验干扰因素加热乙酸法较复杂150mgL-1尿液中盐浓度磺基水杨酸法简便50mgL-1药物及造影剂干化学试带法简便100mgL-1对球蛋白不敏感第二十五页，共四十九页。2626三、尿液蛋白质的检验(jinyn)尿液蛋白质定性(dng xng)采用(ciyng)干化学法或磺基水杨酸法进行尿蛋白初查。加热乙酸法作为尿蛋白定性确证实验。当不同定性实验方法结果不一致时如何处理？第二十六页，共四十九页。2727三、尿液蛋白质的检验(jinyn)1.尿液中存在(cnzi)的蛋白质为球蛋白。加强与临床医师的沟通(gutng)非常必要！磺基水杨酸法阳性，干化学试带法为阴性2.蛋白质含量介于两种方法灵敏度之间。3.尿液中含有青霉素或者造影剂等物质。第二十七页，共四十九页。2828三、尿液蛋白质的检验(jinyn)尿液蛋白质定量(dngling)双 缩 脲 法比 浊 法染料(rnlio)结合法需要对尿液标本进行浓缩处理！第二十八页，共四十九页。2929方 法原 理 双缩脲法蛋白质与碱性铜溶液作用，形成紫色缩合物。比浊法酸性条件下，生物碱类试剂与蛋白质结合沉淀。染料结合法染料与蛋白质结合后最大吸收峰发生漂移。三、尿液蛋白质的检验(jinyn)尿液蛋白质定量(dngling)第二十九页，共四十九页。3030三、尿液蛋白质的检验(jinyn)?如何选择这些(zhxi)定量方法？方 法方法优缺点双 缩 脲 法蛋白质测定经典方法，但灵敏度较低比 浊 法操作简便，线性范围窄，影响因素多染料结合法显色稳定，容易对比色器皿造成污染尿液蛋白质定量(dngling)第三十页，共四十九页。3131三、尿液蛋白质的检验(jinyn)尿液蛋白质定量(dngling)1.根据(gnj)实验室条件选择合适的定量方法。2.卫生部临检中心推荐双缩脲法和丽春红S法。3.加强尿液蛋白质定量的质量控制非常必要！第三十一页，共四十九页。3232尿液蛋白质分类(fn li)SDS-PAGESDS-PAGE凝胶电泳双向凝胶电泳 三、尿液蛋白质的检验(jinyn)第三十二页，共四十九页。3333三、尿液蛋白质的检验(jinyn)尿液蛋白质分类(fn li)：SDS-PAGE凝胶电泳 SDS与蛋白质结合，消除了蛋白质分子(fnz)中的电荷差异，再通过聚丙烯酰胺的分子筛作用，将蛋白质按分子量大小相互分离。第三十三页，共四十九页。3434三、尿液蛋白质的检验(jinyn)尿液标本(biobn)葡聚糖、PEG等SDS-PAGE凝胶电泳染色(rns)、光密度扫描第三十四页，共四十九页。第三十五页，共四十九页。36361 2 3 4AlbAlb小小分分子子量量蛋蛋白白大大分分子子量量蛋蛋白白1 1 肾小球性蛋白尿肾小球性蛋白尿2 2 肾小管性蛋白尿肾小管性蛋白尿3 3 生理性蛋白尿生理性蛋白尿4 4 混合性蛋白尿混合性蛋白尿三、尿液蛋白质的检验(jinyn)第三十六页，共四十九页。3737三、尿液蛋白质的检验(jinyn)尿液蛋白质分类(fn li)：双向凝胶电泳 蛋白组学的重要技术，第一向基于蛋白质的等电点不同进行分离(fnl)，第二向则按蛋白质分子量的不同进行分离。第三十七页，共四十九页。第三十八页，共四十九页。3939三、尿液蛋白质的检验(jinyn)尿液蛋白质分类(fn li)1.SDS-PAGE凝胶电泳用于对尿液蛋白质进行(jnxng)分类。2.双向凝胶电泳主要用于科学研究。第三十九页，共四十九页。4040三、尿液蛋白质的检验(jinyn)第四十页，共四十九页。4141三、尿液蛋白质的检验(jinyn)质量保证u分析前质量控制；u分析中质量控制：坚持室内质控、遵守SOP操作规程(cozuguchng)、注意实验过程中的影响因素；u分析后质量控制：完善的报告审核制度，结果不符合时及时分析原因。第四十一页，共四十九页。4242u生理性蛋白尿u病理性蛋白尿四、尿液蛋白质检验(jinyn)的临床意义肾前性蛋白尿肾性蛋白尿肾后性蛋白尿第四十二页，共四十九页。4343u功能性蛋白尿（functional proteinuria）u体位(t wi)性蛋白尿(postural proteinuria)u偶然性蛋白尿(accidental proteinuria)四、尿液蛋白质检验(jinyn)的临床意义生理性蛋白尿第四十三页，共四十九页。4444病理性蛋白尿肾小球性蛋白尿肾小管性蛋白尿混合性蛋白尿溢出性蛋白尿组织性蛋白尿四、尿液蛋白质检验(jinyn)的临床意义第四十四页，共四十九页。4545 患者，男，68岁，因浮肿、无尿入院。入院前因上呼吸道感染多次使用庆大霉素和复方新诺明而出现浮肿，尿量进行性减少。体格检查：眼睑(ynjin)浮肿，双下肢可凹性水肿。1.初步诊断为什么疾病？2.要明确诊断需要哪些进一步的实验室检查？病例(bngl)急性(jxng)肾小管坏死第四十五页，共四十九页。4646课堂(ktng)小结尿液标本(biobn)蛋白质定性(dng xng)干化学试带法干化学试带法磺基水杨酸法磺基水杨酸法蛋白质定量染料结合法染料结合法比浊法比浊法蛋白质分类第四十六页，共四十九页。4747思考题自主设计(shj)实验加热乙酸法干化学试带法磺基水杨酸法1-+2+-+3-+合成三种(sn zhn)人工尿液，要求：第四十七页，共四十九页。第四十八页，共四十九页。内容(nirng)总结病例(bngl)第四十九页，共四十九页。