2022年医学专题—小鼠口服急性毒性试验等.ppt

食品食品(shp(shpn)n)毒理学毒理学实验实验第一页，共三十一页。课程简介：课程简介：本实验课程主要面向本实验课程主要面向“食品质量与安全食品质量与安全”等专业本等专业本科生，是食品类专业课程食品毒理学的实践环节，科生，是食品类专业课程食品毒理学的实践环节，共有学时数共有学时数1616学时，教学内容包括学时，教学内容包括“小鼠口服急性毒性小鼠口服急性毒性(d xn)(d xn)试验试验”等。实验教学中主要为技能型实验环节，等。实验教学中主要为技能型实验环节，以提高学生应用毒理学基本实验测试食品及药品毒性以提高学生应用毒理学基本实验测试食品及药品毒性(d(d xn)xn)的动手操作应用能力。的动手操作应用能力。第二页，共三十一页。目录目录(ml)(ml)实验实验1 毒理学实验动物基本操作技术训练毒理学实验动物基本操作技术训练实验实验2 小鼠口服急性毒性试验小鼠口服急性毒性试验实验实验3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验实验实验4 小鼠精子小鼠精子(jngz)(jngz)畸形试验畸形试验第三页，共三十一页。实验实验1 毒理学实验动物基本操作技术毒理学实验动物基本操作技术(jsh)(jsh)训练训练1、了解常用实验动物的种类、特性；、了解常用实验动物的种类、特性；2 2、掌握、掌握、掌握、掌握(zhngw)(zhngw)大鼠、小鼠、家兔的捉拿与固定技术；大鼠、小鼠、家兔的捉拿与固定技术；大鼠、小鼠、家兔的捉拿与固定技术；大鼠、小鼠、家兔的捉拿与固定技术；3 3、学会大、小鼠性别的辨认；、学会大、小鼠性别的辨认；、学会大、小鼠性别的辨认；、学会大、小鼠性别的辨认；4 4、掌握大、小鼠灌胃染毒技术，家兔被皮技术；、掌握大、小鼠灌胃染毒技术，家兔被皮技术；、掌握大、小鼠灌胃染毒技术，家兔被皮技术；、掌握大、小鼠灌胃染毒技术，家兔被皮技术；5 5、熟悉大、小鼠生物材料采集方法；、熟悉大、小鼠生物材料采集方法；、熟悉大、小鼠生物材料采集方法；、熟悉大、小鼠生物材料采集方法；6、掌握大鼠断头处死、小鼠脱颈椎处死方法；、掌握大鼠断头处死、小鼠脱颈椎处死方法；7 7、对大、小鼠进行常规解剖，辨认各脏器及正常解剖位、对大、小鼠进行常规解剖，辨认各脏器及正常解剖位、对大、小鼠进行常规解剖，辨认各脏器及正常解剖位、对大、小鼠进行常规解剖，辨认各脏器及正常解剖位置置置置 【实验【实验(shyn)目的】目的】第四页，共三十一页。【实验内容【实验内容(nirng)与方法与方法】（一）实验（一）实验(shyn)(shyn)动物的捕捉固定动物的捕捉固定第五页，共三十一页。第六页，共三十一页。【实验【实验(shyn)内容与方法内容与方法】（二）实验（二）实验(shyn)(shyn)动物性别鉴定动物性别鉴定第七页，共三十一页。（三）染毒（三）染毒(r(rn d)n d)技术技术第八页，共三十一页。第九页，共三十一页。（四）动物（四）动物(dngw)(dngw)的麻醉与外死的麻醉与外死（1）颈椎(jngzhu)(jngzhu)脱臼法（2）断头法（3）击打法（4）急性大出血法（5）药物致死法 第十页，共三十一页。实验实验2 小鼠口服小鼠口服(k(kuf)uf)急性毒性试验急性毒性试验【实验【实验(shyn)目的】目的】1、学习急性毒性试验的试验设计原则，、学习急性毒性试验的试验设计原则，2、学会经口灌胃技术、随机分组方法，、学会经口灌胃技术、随机分组方法，3 3、掌握主要、掌握主要、掌握主要、掌握主要(zhyo)(zhyo)的的的的LD50LD50计算方法和急性毒性分计算方法和急性毒性分计算方法和急性毒性分计算方法和急性毒性分级标准。级标准。级标准。级标准。第十一页，共三十一页。选择健康的试验动物，根据体重按随机分组的方法，依选择健康的试验动物，根据体重按随机分组的方法，依选择健康的试验动物，根据体重按随机分组的方法，依选择健康的试验动物，根据体重按随机分组的方法，依据据据据LD50LD50计算的设计原则将动物分成计算的设计原则将动物分成计算的设计原则将动物分成计算的设计原则将动物分成(fn chn)(fn chn)数个染毒组。数个染毒组。数个染毒组。数个染毒组。一次或一次或一次或一次或24h24h内多次给予受试物后，了解动物所产生的急内多次给予受试物后，了解动物所产生的急内多次给予受试物后，了解动物所产生的急内多次给予受试物后，了解动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，观察受试物毒性反应与剂量的关系，求出半死亡原因，观察受试物毒性反应与剂量的关系，求出半死亡原因，观察受试物毒性反应与剂量的关系，求出半死亡原因，观察受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死量（数致死量（数致死量（数致死量（LD50LD50），并根据），并根据），并根据），并根据LD50LD50值将受试物进行急性值将受试物进行急性值将受试物进行急性值将受试物进行急性毒性分级。毒性分级。毒性分级。毒性分级。【实验【实验(shyn)原理】原理】第十二页，共三十一页。健康小鼠或大鼠的选择，性别的辨认健康小鼠或大鼠的选择，性别的辨认(binrn)(binrn)。称重、编号和随机分组方法。称重、编号和随机分组方法。受试化学物溶液的配制。受试化学物溶液的配制。小鼠和大鼠经口灌胃技术。小鼠和大鼠经口灌胃技术。毒性体征的观察、毒性体征的观察、LD50计算和毒性分级。计算和毒性分级。【实验【实验(shyn)内容】内容】第十三页，共三十一页。LD50计算计算(j sun)(j sun)根据受试物的种类由指导教师事先确定采根据受试物的种类由指导教师事先确定采用何种方法用何种方法(改进寇氏法，霍恩法等改进寇氏法，霍恩法等)进行进行计算，并在试验前设计计算，并在试验前设计(shj)(shj)剂量分组和每剂量分组和每组动物数。选择适宜的方法求出组动物数。选择适宜的方法求出LD50及及95的可信限范围。如毒性反应存在性别的可信限范围。如毒性反应存在性别差异，应分别求出不同性别动物的差异，应分别求出不同性别动物的LD50值。值。第十四页，共三十一页。结果结果(ji gu(ji gu)评定评定 根据实验动物中毒体征、死亡时间根据实验动物中毒体征、死亡时间(shjin)(shjin)和和特征、特征、LD50，接受试物种类，分别参照，接受试物种类，分别参照相应的经口急性毒性分级标准进行评定，相应的经口急性毒性分级标准进行评定，判断该受试物的毒性大小及毒性特征。判断该受试物的毒性大小及毒性特征。第十五页，共三十一页。实验实验(shyn)(shyn)3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验【实验【实验(shyn)目的】目的】1 1、了解骨髓细胞微核实验及毒理学意义了解骨髓细胞微核实验及毒理学意义2、掌握(zhngw)(zhngw)实验原理其实验方法。第十六页，共三十一页。外来化学物干扰细胞的有丝分裂或使染色体发生断裂损伤，使外来化学物干扰细胞的有丝分裂或使染色体发生断裂损伤，使细胞在有丝分裂后期细胞在有丝分裂后期(huq)(huq)受损的染色体或其片断不能及时进入受损的染色体或其片断不能及时进入细胞核，而留在细胞质中，形成大小为主核细胞核，而留在细胞质中，形成大小为主核1/20 1/20 至至1/5 1/5 的微核。的微核。骨髓嗜多染红细胞为刚刚成熟排出主核的细胞，细胞中如果有骨髓嗜多染红细胞为刚刚成熟排出主核的细胞，细胞中如果有微核形成则会很清晰观察到。检测的遗传学终点：染色体分离微核形成则会很清晰观察到。检测的遗传学终点：染色体分离改变或完整性改变。改变或完整性改变。毒理学意义：由于微核是骨髓细胞染色体断裂后产生，所以毒理学意义：由于微核是骨髓细胞染色体断裂后产生，所以可用来检测化学物是否具有致突变作用。可用来检测化学物是否具有致突变作用。【实验【实验(shyn)原理】原理】第十七页，共三十一页。（一）实验动物的处理（二）微核分析片准备(zhnbi)(zhnbi)（三）固定（四）染色【实验方法【实验方法(fngf)与步骤】与步骤】第十八页，共三十一页。（五）（五）结果结果(ji gu(ji gu)观察与计算观察与计算 先于低倍镜下选择(xunz)(xunz)细胞分布均匀、染色均匀，细胞无损区域，再在油镜下计算500个嗜多染细胞的微核率。微核出现率微核出现个数/细胞数100 第十九页，共三十一页。正常正常(zhngchng)(zhngchng)对照对照第二十页，共三十一页。实验实验(shyn)(shyn)示范示范第二十一页，共三十一页。（六）结果（六）结果(ji gu(ji gu)评价评价将各组微核率进行X2检验，判断其影响程度，还可进行剂量反应关系(gun x)(gun x)评价 第二十二页，共三十一页。实验实验(shyn)(shyn)4 小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验【实验【实验(shyn)目的】目的】1 1、掌握小鼠精子畸形试验方法：包括掌握小鼠精子畸形试验方法：包括(boku)(boku)动动物选择、剂量分组、取材、制片、染色、观察物选择、剂量分组、取材、制片、染色、观察整个过程；整个过程；2、熟悉畸形精子形成的原因：控制精子形态的基因受损、精子发生过程受影响、能量提供不足、精子膜受损等。第二十三页，共三十一页。二、实验二、实验(shyn)(shyn)器材、试剂器材、试剂（一）器材生物显微镜、解剖剪、镊子、表面皿、离心管、小漏斗(ludu)(ludu)、吸管、滴管、载玻片、擦镜纸等。（二）试剂1、1%伊红染色液：称取伊红1g溶于100ml蒸馏水中。2、生理盐水、甲醇（A.R）第二十四页，共三十一页。1、剂量设计 2、染毒(rn d)(rn d)3、制片 4、固定 5、染色 6、观察与计数【实验【实验(shyn)内容与步骤】内容与步骤】第二十五页，共三十一页。第二十六页，共三十一页。第二十七页，共三十一页。第二十八页，共三十一页。结果统计结果统计(t(tngj)ngj)与分析与分析 第二十九页，共三十一页。第三十页，共三十一页。内容(nirng)总结食品毒理学实验。实验教学中主要为技能型实验环节，以提高学生应用毒理学基本实验测试食品及药品毒性的动手操作应用能力。1、学习急性毒性试验的试验设计原则，。毒性体征的观察、LD50计算和毒性分级。根据受试物的种类由指导教师事先确定采用何种方法(改进寇氏法，霍恩法等)进行(jnxng)计算，并在试验前设计剂量分组和每组动物数。2、掌握实验原理其实验方法。微核出现率微核出现个数/细胞数100。结果统计与分析第三十一页，共三十一页。