ELISA检测(jiǎncè)乙肝抗体组员:李家成(1520150102)林其聪(1520150103)付强(1520150104)郑海军(1520150105)管汝(1420151143)分工(fēngōng)汇报:林其聪PPT制作:李家成,付强第一页,共二十页。ELISA检测(jiǎncè)乙肝抗体第二页,共二十页。肝表面(biǎomiàn)抗体ELISA检测实验目的1.掌握ELISA的原理和操作方法。2.熟悉酶标仪的使用(shǐyòng)方法。第三页,共二十页。•免疫标记技术免疫标记技术是用荧光、酶、或者放射性核素等标记抗体或抗原(kàngyuán),利用标记技术的高度敏感性进行的抗原(kàngyuán)抗体的反应。细胞(xìbāo)1细胞(xìbāo)2标记物分类荧光素放射免疫技术放射性核素免疫荧光技术酶免疫酶技术第四页,共二十页。免疫(miǎnyì)酶技术用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可用酶标测定(cèdìng)仪测定(cèdìng)光密度(OD)来反应抗原或抗体含量,灵敏度可达到ng—pg/ml。细胞(xìbāo)1标记物DH2+H2O2D+2H2O酶具有高效催化性:可加快化学反应的速率;在反应前后没有质和量的改变;微量的酶便可发挥巨大的催化作用第五页,共二十页。酶免疫(miǎnyì)技术•酶联免疫吸附试验(shìyàn)•酶免疫组化法用于检测(jiǎncè)可溶性抗原或抗体用于检测组织或细胞表面的抗原第六页,共二十页。酶联免疫吸附试验(shìyàn)-ELISAELISA是一种免疫测定(immunoassay,IA)。抗原或者抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记:加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物;产物的量与标本中受检物质的量直接(zhíjiē)相关,由此进行定性或定量分析。第七页,共二十页。酶联免疫吸附实验(shíyàn)—ELISA•实验原理抗原或抗体吸附到固体相载体表面后,以及抗原抗体与酶连接后,仍保持免疫活性和酶活性,当酶遇到相应第底物时,在酶的催化下引起底物水解显色。产物的量与标体中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅(shēnqiǎn)进行定性或定量分析。第八页,共二十页。ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体(kàngtǐ)。在这种测定方法有三个必要的试剂:(1)免疫(miǎnyì)吸附剂(2)结合物(3)酶反应的底物第九页,共二十页。ELISA的类型(lèixíng)间接法(测抗体)双抗体夹心(jiāxīn)发(测大分子抗原)竞争发(测小分子抗原)第十页,共二十页。第十一页,共二十页。第十二页,共二十页。竞争法用于抗原和半抗原的定量(dìngliàng)测定,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,将特异性抗...