免疫组化、免疫荧光、流式细胞术的应用比较及常见问题分析宋砚明song_yanming@wuxiapptec第一页，共三十五页。免疫组化〔IHC〕的应用介绍免疫荧光〔IF〕的应用介绍流式细胞术〔FC〕的应用介绍IHC、IF、FC区别与联系第二页，共三十五页。免疫组织化学原理及特点利用抗原与抗体的特异性结合原理和特殊的标记技术，通过化学反响使标记抗体显色，对组织细胞内的特异性抗原进行定位、定性、定量检测的一门技术。免疫组化具有操作简单，特异性强，敏感性高，定位准确，形态与功能相结合等特点。免疫组织化学〔Immunohistochemistry,IHC〕第三页，共三十五页。细胞抗原一抗二抗辣根过氧化物酶〔HRP〕3，3-二氨联苯胺〔DAB〕显色剂棕褐色络合物IHC反响原理示意图第四页，共三十五页。组织切片/芯片制作第五页，共三十五页。2.组织芯片应用领域组织芯片的应用领域包括与生命科学相关的根底研究、临床研究、应用研究和新药开发等。免疫组化染色〔IHC〕；原位杂交〔ISH〕；荧光原位杂交〔FISH〕；原位末端标记分析〔TUNEL〕；原位PCR以及激光捕获显微别离系统辅助的cDNA杂交。1.组织芯片组织芯片〔或组织微阵列〕是将数十个甚至上千个不同个体的组织标本集成在一张固相载体上，组织芯片中含有蛋白，RNA及DAN分子，是一种高通量的研究分析工具。研究者一次可有效利用成百上千份正常或疾病状态下的组织标本来研究特定基因及其所表达的蛋白质与疾病之间的关系。3.Abgent现有组织切片/芯片产品全套鼠类器官组织切片；全套猴类器官组织切片；人类常见癌症组织切片；组织芯片客户定制效劳。组织芯片/切片应用第六页，共三十五页。免疫组化流程示意图第七页，共三十五页。2.SP法原理：根据生物素(Biotin)与链霉亲和素(Streptavidin)具有强结合力的原理设计。在一抗〔兔源与鼠源〕与相应的靶抗原结合后，生物素化标记的抗多价二抗与一抗特异结合；二抗上标记的生物素与标记了辣根过氧化物酶〔HRP〕的链霉亲和素结合，形成抗原～特异性一抗～生物素化的二抗～HRP标记的链霉亲和素复合物。特点：该法孵育时间短〔通常为10min〕，灵敏度高以及低背景染色等特点。1.SABC法原理：SABC法是利用链酶亲和素(Streptavidin)与生物素(Biotin)特有的高度亲和力这一生物学性质，先将生物素与辣根过氧化物酶(HRP)结合，形成生物素化HRP，然后与链酶亲和素按一定比例混合，形成SABC复合物。用生物素化二抗与第一抗体结合，再与SABC复合物联结形成抗原～抗体～生物素化二抗～...
