·论著·缺糖缺氧／再灌注对星形胶质细胞外泌体ｍｉＲＮＡｓ表达的影响＊韩韦华，黄庭睿，文田甜，沈耀温州医科大学检验医学院（生命科学学院）／检验医学教育部重点实验室，浙江温州３２５０３５摘要：目的探讨缺糖缺氧／再灌注（ＯＧＤ／Ｒ）对星形胶质细胞外泌体中微小ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡｓ）表达的影响。方法对新生原代培养的ＳＤ大鼠大脑皮层星形胶质细胞进行缺糖缺氧（ＯＧＤ）或ＯＧＤ／Ｒ处理，采用超高速离心法分别收集培养基上清液和细胞内的外泌体。通过透射电镜和流式细胞术鉴定外泌体。采用ＩｌｌｕｍｉｎａＨｉｓｅｑ２５００测序平台检测外泌体ｍｉＲＮＡｓ的表达谱，从中选取表达受ＯＧＤ及ＯＧＤ／Ｒ处理影响的ｍｉＲＮＡｓ。并用实时荧光定量聚合酶链反应（ｑＰＣＲ）对生物信息学分析中差异有统计学意义的ｍｉＲＮＡｓ进行实验验证。使用ｍｅｔａｓｃａｐｅ和ｍｉＲＷａｌｋ预测高表达ｍｉＲＮＡｓ的靶基因，再将挑选出的共同靶基因在Ｗｅｂｇｅｓｔａｌｔ中进行ＫＥＧＧ富集分析。采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ（ＷＢ）检测ＯＧＤ／Ｒ及其星形胶质细胞外泌体对全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）诱导分化的ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞Ｅｒｋ磷酸化水平的影响。结果与对照组相比，ＯＧＤ４ｈ处理改变了星形胶质细胞外泌体ｍｉＲＮＡｓ的表达谱；而再灌注２４ｈ后改变的ｍｉＲＮＡｓ大部分恢复到对照组水平。ｑＰＣＲ验证显示：３种ｍｉＲＮＡｓ在外泌体中的分布水平远高于细胞，而且这种富集作用可能不受ＯＧＤ刺激的影响。ＫＥＧＧ富集分析显示：表达上调ｍｉＲＮＡｓ的靶基因信号通路主要为代谢通路，包括ＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ、ＭＡＰＫ和ｍＴＯＲ信号通路等。ＯＧＤ、ＯＧＤ／Ｒ及正常星形胶质细胞外泌体处理均能上调相应培养条件下ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞的ｐ－Ｅｒｋ１和ｐ－Ｅｒｋ２水平。结论ＯＧＤ处理能显著影响星形胶质细胞外泌体ｍｉＲＮＡｓ的表达，其外泌体中富集分布的ｍｉＲＮＡｓ均靶向作用于代谢通路，如ＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ、ＭＡＰＫ和ｍＴＯＲ等信号通路。关键词：星形胶质细胞；外泌体；ｍｉＲＮＡｓ；缺糖缺氧／再灌注ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４１３０．２０２３．０４．０１０中图法分类号：Ｒ３６４．４文章编号：１６７３－４１３０（２０２３）０４－０４３０－０６文献标志码：ＡＥｆｆｅｃｔｓｏｆｏｘｙｇｅｎ－ｇｌｕｃｏｓｅｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ／ｒｅｃｏｖｅｒｙｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏ...
