分子植物育种，2023年，第21卷，第3期，第826-835页MolecularPlantBreeding,2023,Vol.21,No.3,826-835研究报告ResearchReport内生真菌AlternariaoxytropisOW7.8中酵母氨酸还原酶基因启动子克隆表达及酶学性质闵钰1*赵利娜1,2*卢萍1**杜玲1**袁博1姜凯11内蒙古师范大学生命科学与技术学院,呼和浩特,010022;2河北北方学院医学检验学院,张家口,075000*同等贡献作者**共同通信作者,luping@imnu.edu.cn;nmduling@163.com摘要本研究利用TAIL-PCR法克隆小花棘豆内生真菌A.oxyrtropisOW7.8sac启动子序列，并进行功能元件预测；构建pBARGPEI-mCherry-sac启动子表达载体，将该表达载体转化OW7.8原生质体，经再生培养得sac启动子转录激活功能株。提取分离A.oxyrtropisOW7.8中的Sac，对其进行酶活力、最适pH值、最适温度、Km和Vmax研究。结果表明：荧光显微镜下检测到转录激活功能株有明亮红色荧光，而野生株OW7.8无红色荧光，sac启动子驱动了红色荧光蛋白基因的转录。Sac逆向反应的最适pH值为7.0，最适温度为24℃；以酵母氨酸为底物的Km=0.142mmol/L、Vmax=0.067μmol/min，以NADP+为底物的Km=0.457mmol/L、Vmax=0.235μmol/min。为深入研究该内生真菌SW生物合成途径与调控机制提供了重要基础数据。关键词内生真菌;苦马豆素;酵母氨酸还原酶;酶学性质PromoterCloningandExpression,EnzymaticPropertiesofSaccharopineReductaseinAlternariaoxytropisOW7.8MinYu1*ZhaoLina1,2*LuPing1**DuLing1**YuanBo1JiangKai11CollegeofLifeSciencesandTechnology,InnerMongoliaNormalUniversity,Hohhot,010022;2MedicalLaboratoryCollege,HebeiNorthUniversi-ty,Zhangjiakou,075000*Theseauthorscontributedequallytothiswork**Co-correspondingauthors,luping@imnu.edu.cn;nmduling@163.comDOI:10.13271/j.mpb.021.000826AbstractThesacpromoterofSaccharopinereductase(Sac)inendophyticfungusAlternariaoxytropisOW7.8wasclonedbyTAIL-PCR,anditsfunctionalelementswerepredicted.ThepromoterexpressionvectorpBARG-PEI-mCherry-sacwasconstructedanditwastransformedintoOW7.8protoplasts.Thesacpromotertranscriptionalactivatedstrainwasobtainedthroughregeneration.SacwasisolatedfromA.oxyrtropisOW7.8,andenzymeactiv-ities,optimalpH,optimaltemperature,KmandVmaxweredetermined.Theresultswereasfollows:Theredfluores-cencewasdetectedunderthefluorescencemi...
