UCP1基因-3826A_...型糖尿病患病率相关性的研究_刘永新.pdf

中国糖尿病杂志2023年1月第31卷第1期Chin J Diabetes，January 2023，Vol.31，No.1 糖尿病分子生物学和遗传学 UCP1基因3826AG位点多态性与云南大理地区2型糖尿病患病率相关性的研究刘永新易明珠赵茜黄京赵野王雨晴杨彩婷孙曙光忽胜和来明名【摘要】目的探讨解偶联蛋白 1（UCP1）基因-3826 AG 位点多态性与云南大理地区 T2DM 患病率的相关性。方法选取 2021 年 112 月于大理大学第一附属医院内分泌科收治的 204 例T2DM 患者（T2DM 组），同期选取 174 名体检健康者为正常对照（NC）组，收集两组一般资料和生化指标，采用竞争性等位基因特异性 PCR（KASP）对 UCP1 基因-3826 AG 位点进行基因分型并统计分析。结果T2DM、NC 组 UCP1 基因-3826 AG 位点基因型均符合 Hardy-Weinberg 遗传平衡（P0.05）。T2DM 组 AG、GG 基因型频率和 G 等位基因频率高于 NC 组。AG、GG 基因型和 G 等位基因可增加 T2DM 风险 1.638、2.109 和 1.386 倍。T2DM 患者 AG 和 GG 基因型 BMI 高于 AA 基因型（PG 位点多态性与云南大理地区 T2DM 相关，且该基因位点突变增加 T2DM 风险。【关键词】解偶联蛋白 1；基因多态性；基因型；糖尿病，2 型doi：10.3969/j.issn.1006-6187.2023.01.005Association of UCP1 Gene3826AG polymorphism with type 2 diabetes mellitus in Dali,Yunnan provinceLIU Yongxin，YI Mingzhu，ZHAO Xi，et al.Basic Medical College，Dali University，Dali 671003，ChinaCorresponding author：LAI Mingming，Email：【Abstract】ObjectiveTo investigate the relationship between-3826 AG polymorphism of uncouplingprotein 1（UCP1）gene and type 2 diabetes mellitus（T2DM）in Dali，Yunnan Province.MethodsA totalof 204 patients with T2DM were selected as the study group（T2DM）and 174 healthy people as the controlgroup（NC）.The general data and biochemical indexes were collected.The-3826 AG polymorphism ofUCP1 gene was evaluated by kompetitive allele specific PCR（KASP），and statistical analysis wasperformed.ResultsThe genotype frequencies of-3826 AG locus of UCP1 gene were in Hardy-Weinbergequilibrium in T2DM group and NC group（P0.05）.The frequencies of AG，GG genotype and G allelewere higher in T2DM group than in NC group.The risk of T2DM was increased by 1.638，2.109 and1.386 times respectively in patients with AG，GG genotype and G allele.Among T2DM patients，BMI wassignificantly higher in patients with AG and GG genotype than in patients with AA genotype（PG locus polymorphism of UCP1 gene was associated with the occurrence ofT2DM in Dali，Yunnan Province，and this mutation could increase the risk of T2DM.【Key words】Uncoupling protein 1；Gene polymorphism；Genotype；Diabetes mellitus，type 2T2DM 是常见非传染慢性疾病1。近 30 年来，我国 DM 患病率升高，是全球 DM 人口最多的国家2。T2DM 主要是由遗传、环境和生活习惯等引起3-4。T2DM 目前无法根治，患者主要通过药物或生活方式改变来控制病情，遗传因素一定程度上决定了个体对 T2DM 的易感性。近年来研基金项目：国家级大学生创新创业训练项目（202110679036）；大理大学大学生科研基金（KYSX2015020）作者单位：671003 大理大学基础医学院（刘永新、易明珠、赵茜、黄京、赵野、王雨晴、杨彩婷、来明名）；大理大学第一附属医院内分泌科（孙曙光），检验科（忽胜和）通信作者：来明名，Email： 17中国糖尿病杂志2023年1月第31卷第1期Chin J Diabetes，January 2023，Vol.31，No.1究5-7发现许多与 DM 发生相关的基因单核苷酸多态 性（SNP）位 点，包 括 胰 岛 素 分 泌 相 关 基 因（TCF7L2、SLC30A8）、IR 相关基因（PPAR）等。BMI、WHR、WC 能较好反映 DM 患病风险8。脂肪细胞堆积，外周组织胰岛素受体亲和力减低，从而加重 IR，可能是肥胖促进糖代谢异常的机制。解偶联蛋白 1（UCP1）基因位于 4 号染色体，在具有产热功能的棕色脂肪组织（BAT）中特异性高表达，主要功能是参与 BAT 产热调节来维持能量代谢平衡，在肥胖和代谢紊乱的发生发展中起重要作用9。UCP1 基 因 启 动 子 区 域 的-3826 AG、-1766 AG 和-112 AC、外 显 子 2 中 的Ala64Thr 多态性与肥胖、DM、体脂堆积、BMI 或MS 相关10-12。-3826 AG 位点多态性与沙特阿拉伯人群肥胖密切相关，突变 G 等位基因升高BMI 和 TG，降低 HDL-C13。巴西人群-3826 AG位点 GG 基因型发生 T2DM 的频率低于 AA 基因型14。云南是我国少数民族最多的省份，不同遗传特质、起居习俗可能引起 DM 易感基因差异。本研究通过探讨 UCP1 基因-3826 AG 位点多态性与云南大理地区 T2DM 的相关性，旨在为临床治疗 T2DM 提供依据。对象与方法一、研究对象选取 2021 年 112 月于大理大学第一附属医院内分泌科收治的 204 例 T2DM 患者（T2DM组），均符合 2020 版中国 2 型糖尿病防治指南诊断标准。排除标准：T1DM、GDM 及特殊类型 DM患者；合并恶性肿瘤、血液系统疾病、代谢性疾病、严重肝肾功能不全患者。同期选取 174 名体检健康者为正常对照（NC）组。本研究通过大理大学生物医学伦理委员会审核批准，所有研究对象均签署知情同意书。二、研究方法1.生化指标检测：所有患者禁食 10 h 以上，于次日晨空腹抽取肘静脉血 23 ml，分离血清后采用日立 7600 全自动生化分析仪检测总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、白球比（ALB/GLB）、BUN、血肌酐（Scr）、血尿酸（SUA）、FPG、果糖胺（FMN）、TC、TG、HDL-C、LDL-C、载脂蛋白 A1（APOA1）和载脂蛋白 B（APOB）。2.全血基因组 DNA 提取：采用 EDTA 抗凝的采血管收集研究对象 12 ml 静脉血，取 200 l混匀后的全血利用基因组 DNA 试剂盒（北京天根生物科技有限公司）提取基因组 DNA。取 1 l 上述提取的基因组 DNA 利用微量核酸浓度测定仪（美国 Thermo 公司）测定浓度为 2050 ng/l，A260/A280 为 1.61.8，置于80冰箱（美国Thermo 公司）备用。3.UCP1 基因-3826 AG 位点多态性分型：采用竞争性等位基因特异性 PCR（KASP）检测DNA 样本基因型。根据 UCP1 基因（-3826 AG）SNP 位点（rs1800592）设计 3 条 KASP 标记引物，包括 2 条正向特异性引物和 1 条反向通用引物（表 1）。2 条正向引物对应两种荧光信号，经过KASP 反应，最终通过检测两种荧光值大小来判断样本基因分型情况。KASP 反应体系为 10 l，包括 4.78 l 基因组 DNA，5 l 2KASP Master Mix（英国 LGC 公司），0.14 l KASP Assay Mix，0.08 lMg2+。采用降落 PCR 进行扩增，反应程序为 94热处理 15 min；94变性 20 s，6155退火和延伸 60 s，10 个降落循环（每个循环降低 0.6）；94变性 20 s，55退火和延伸 60 s，26 个循环；4避光保存。在 ABI-Step One Plus PCR 仪上进行 PCR 反应，每次反应设置 1 个空白对照组，其DNA 模板用洗脱液 TE 代替，反应结束后进行基因分型分析。表 1引物序列Tab 1Primer sequence基因GeneUCP1-3826AGSNP1800592引物序列Primer sequencePrimer-F（A）：GAAAATGTAGAACACATTAACAAATGCACTTPrimer-F（G）：AAAATGTAGAACACATTAACAAATGCACTCPrimer-R：AGCGATTTCTGATTGACCACAGTTTGAT 18中国糖尿病杂志2023年1月第31卷第1期Chin J Diabetes，January 2023，Vol.31，No.1三、统计学处理采用 SPSS 25.0 软件进行统计学分析。正态分布计量资料以 xs 表示，两组间比较采用 t 检验，多组间比较采用单因素方差分析。计数资料以n（%）表示，采用2检验。基因型采用Hardy-Weinberg遗传平衡检验。以 P0.05 为差异有统计学意义。结果一、两组一般资料及生化指标比较与 NC 组比较，T2DM 组血清 BUN、FPG、FMN、TG 升高（P0.05），血清 TP、ALB、GLB、ALB/GLB、HDL-C、APOA1 降低（P0.05）。（表 2）表 2两组一般资料及生化指标比较（xs）Tab 2Comparison of general data and biochemical indexes between the two groups（xs）组别GroupNCT2DMP例数（男/女）n（M/F）174（82/92）204（115/89）0.073年龄（岁）Age（Years）53.4114.3355.7411.930.090民族（汉/白/其他）Nationality（Han/Bai/Other）77/85/1289/97/180.786TP（g/L）76.894.1169.947.550.001ALB（g/L）46.262.5040.586.300.001GLB（g/L）30.633.7929.365.310.007组别GroupNCT2DMPALB/GLB1.500.301.400.300.001BUN（mmol/L）5.451.435.862.840.019Scr（