神经细胞培养第一节：细胞培养的基本知识1定义：组织培养(Tissueculture)：细胞培养(cellculture)：器官培养(organculture)：统称为体外培养（Invitro)2组织或细胞培养的优点：1）：研究对象是活细胞2）：研究条件可以人为的控制3）：研究的样本可以达到比较均一性4）：研究的内容便于观察、检测和记录5）：研究的费用相对比较经济6）：可作为一些遗传物质的运载细胞7)：干细胞的广泛应用前景3组织或细胞培养的不足：1）与体内条件存在差异；2）细胞培养存在一定的不稳定性培养细胞学的研究内容1培养细胞学在病毒学中的应用2细胞生物学的基础研究:细胞培养使细胞生物学迅速发展3细胞工程学的研究手段，利用细胞融合及杂交技术，进行细胞工程的研究与开发。4干细胞的培养及应用5淋巴细胞培养技术的应用6遗传性疾病的产前检查7细胞作为毒性实验及生物安全性实验的工具8细胞培养在现代生物技术中应用很广，如基因分离，基因测序与表达，基因转移与重组，癌基因的研究等。4培养细胞的特性1）培养细胞生长方式：a贴附生长型细胞（大多数）b悬浮生长型细胞（少数）2）培养细胞生长特点：贴附；接触抑制；密度依赖性5培养细胞生长的条件1）细胞的营养需要：a基本营养物质：氨基酸、维生素、碳水化合物及一些无机离子；b营养因子等物质2）细胞的生存环境：a温度：哺乳动物和人类为35~37℃；鸟类为38.5℃b气相及PH值：O2及CO2的值：CO2=5%；PH=7.2~7.4c渗透压：260~320mmol/L3)无污染及无毒：体外培养的细胞必须生长于无污染及无毒的环境！！无毒：与细胞直接接触者—培养器皿、底物、培养基，蒸馏水等；间接接触者—配制培养基的器皿、瓶盖、瓶塞等无污染：微生物及交叉污染，（霉菌污染常见）6常用的培养用液及培养基培养用液：水平衡盐溶液（ＢＳＳ）（见表）作用：消化液１胰蛋白酶液（０．２５%）２二乙烯四乙酸二钠（ＥＤＴＡ）３胶原酶：甘氨酸羟脯氨酸敏感培养基：1天然培养基（血清，血浆，组织浸出液，水解乳蛋白）2合成培养基（ＭＥＭＤＭＥＭＨＡＭ`SF12ＲＰＭＩ（１６４０）１９９Ｌ－１５）等常用的平衡盐溶液（g/L）Ringer(1985)PBSEargle(1948)Hanks(1949Dulbecco(1954)D-HanksNaClKCl9．000．428．000．206．800．408．000．408．000．208．000．40CaCl2MgCl.6H2OMgSO4.7H2O0．250．200．200．140．201．100．10Na2HPO4.H2O1．560．060．06Na2HPO4.2H2OKH2PO40．201．140．062．420．200．06NaHCO3葡萄糖酚红3．201．000．020．351．00...
