药敏试验简介卢先雷本节课程需要掌握的内容•什么是药敏试验，什么时候需要做药敏试验——即药敏试验的临床指征是什么？•药敏试验方法学——怎么做•药敏试验结果的正确判读与解释——怎么观察•药敏结果的正确报告•药敏试验的室内质量控制药敏试验的概念与适应征•通过模拟体内环境条件，测试分离自病人体内感染部位的病原菌对常用抗生素的敏感性，即抗生素对目标细菌的抑制能力，从而预测抗生素治疗效果的一种体外试验方法。•药敏试验适应征：分离菌是感染菌而不是定植菌或污染菌；常规经验治疗效果不佳或有较高失败风险时；对感染菌的耐药性无法估计时；需要了解微生物耐药性变迁时药敏试验方法学•纸片扩散法•稀释法（MIC法）–肉汤稀释法•常量稀释法•微量稀释法–琼脂稀释法•E-test法药敏试验方法学指南•美国CLSI–M2-A10DiskDiffusion(2009)*–M7-A8MIC(2009)*–M11-A7Anaerobes(2007)–M24-AMycobacteria,Nocardiae,andOtherAerobicActinomycetes–M27-A2FungalMIC(2002)–M44-AFungaDiskDiffusion(2004)–M45-AInfrequentlyIsolated/FastidiousBacteria(2006)*M2,M7updatedevery3years*M2,M7updatedevery3years•其他标准：–法国CASFM标准；梅里埃产品习惯采用的CLSI以外的标准–英国BSAC标准；欧洲应用比较广泛的标准–德国DIN标准……..纸片扩散法•原理–一定药物含量的碟形抗生素纸片贴在涂布一定浓度菌液的琼脂上，过夜培养后抗生素扩散到纸片周围的琼脂中，形成一定浓度区域，越靠近纸片的浓度越高，反之越低；–当低到一定程度（MIC以下）时药物无法抑制细菌的生长，从而形成界限分明的抑菌环–通过抑菌环大小与MIC值高低之间的统计学分布关系，经过回归处理可以求出细菌对某种抗生素的MIC折点范围对应的抑菌环大小值。由此可知，MIC与抑菌环大小之间存在负相关，。试验方法与条件•CLSI推荐培养基：–普通营养要求细菌使用水解酪蛋白琼脂（MHA）平板–肺链使用含5%绵羊血的含血MHA–嗜血杆菌使用HTM培养基–淋球菌使用含1%生长因子（不含L-半胱氨酸）补充剂的GC培养基•平皿大小：最小90mm，通常使用150mm平板•琼脂厚度4±1mm•菌液浓度0.5McF（约1.5×108CFU/ml）•涂布方法：无菌棉签浸透菌液后稍微挤干，棉签与平板呈30°左右的倾角密集左右来回涂布，完成一遍后旋转120°后再涂，如此三次，最后绕边缘一次•纸片之间最佳间距30mm，不得低于25mm•培养温度；35℃；重叠时不超过3个碟子•气体环境：普通细菌大气环境；...
