神经细胞体外培养神经细胞体外培养方法及应用方法及应用田东萍汕大医学院病理教研室神经细胞体外培养的历史神经细胞体外培养的历史神经组织的体外培养方法是由Harrison，于1907年首创的。由于该方法具有简化细胞生化环境、明确生长条件、便于施加实验因素及容易获得活体直接观测结果等优点，因而已成为研究神经系统结构和功能的有效手段。九十余年来，这项技术已从组织块（或植块）培养（explantculture）发展到分离细胞培养(dissociatedcellculture)，并逐渐与多种现代技术结合起来，在神经科学各领域发挥了重大作用。组织块培养→分离细胞培养→甚至单一型细胞培养神经组织的植块培养法悬滴培养方法单盖玻方法双盖玻方法1925改良双盖玻方法培养物：CNS灰质、白质、外周神经节或神经小段↓↓突起非神经元外伸优点所需培养液量少，可反应组织代谢中微量生化改变保留了植块内组织特征不足培养空间小，O2CO2供少培养空间湿度难以控制，水分会蒸发密封手续繁杂，不利更换培养液，难以观察单个神经元生长。神经元的分离细胞培养方法1956年，Nakai首创了神经组织的分离培养方法材料来源：胚胎动物神经组织神经元增殖发生于胚胎期形态学分化和化学分化程度低，体外存活强，成熟后则相反，且神经元会受到大的普遍损伤。部位：部位：灰质、PNS神经节，神经元集中，密度大神经元的体外培养液天然合成成分血清血浆胚胎撮液人工培养基无血清培养基化学限定性培养基常用的：DMEM+添加剂F12①葡萄糖为神经元能量代谢主要来源33mm②CO2NaHCO3缓冲系统重要HEPESO2耗量更高③K+神经元生理活动的重要离子，K+是神经元存活所必需的，K+24.5mM能提高神经元存活，促分化④非神经元成分的抑制有2-3天神经元无血清限定培养液人工合成的培养基虽然具备了细胞生长的基本营养物质和无机盐类，但仍无法满足不同类型细胞的特殊需要。大多数神经元在基础培养液中即使能够存活也为期不长，更难以分裂。因此可根据神经元的特性，给基础培养中再添加某些特殊物质。选择添加剂的基本过程限定连续细胞系的体外生长条件。试定该细胞系来源的细胞的培养液条件。Bottenstein实验室经过长期研究发现如下添加剂比较好人转铁蛋白、牛胰岛素、硒酸钠、孕酮、腐胺加入到F12与DMEM1:1混液中，可以代替血清添加物，用来培养大鼠CNS的成神经细胞瘤细胞。删去其中任何一种添加物都可导致成神经细胞瘤细胞生长状况锐减。该实验室共列出了三种神经元限...
