流式细胞术的原理及其应用马洪星FLOWCYTOMETRY流式细胞术FLOWCYTOMETOR流式细胞仪•FlowCytometry–Measuringpropertiesofcellsinflow•FlowSorting–Sorting(separating)cellsbasedonpropertiesmeasuredinflow–AlsocalledFluorescence-ActivatedCellSorting(FACS)分为三大类：第一类－－台式机光路调节系统固定，自动化程度高，操作简便，易学易掌握,适合用于临床第二类－－大型机科研型，分辨率高，可分选用于培养，可选配多种激光器，更灵活第三类－－新型流式细胞仪装配有2～4根激光管，同时检测15个参数，高速分选达50000个/s流式细胞仪的主要组成部分：流式细胞术是20世纪70年代发展起来的一种技术，有人将流式细胞仪比喻成高级的荧光显微镜。目前，该技术以广泛用于生物及医学基础研究与临床检测，在分子生物学、免疫学、遗传学、血液学、肿瘤学等领域内发挥着重要作用。流式细胞仪荧光显微镜控制电脑人脑光源激光紫外光标本制备成的单细胞（或颗粒）悬液放于固定的标本台上效率高几百~几万个细胞/秒低几十个细胞/分结果精确、客观有主观因素功能可同时测多个参数、能进行分选一般只测一个参数、不能分选鞘液系统流动室光路系统检测区光学原理laser抗体标记的方法抗体的选择•首选直接标记抗体•荧光分子PE最强，适用于弱表达抗原FITC最便宜，适用于强表达抗原•间接标记适用范围广,biotin-avidin不适合弱抗原的检测数据处理系统流式细胞分析的信息•Forwardscatter(FSC)•Sidescatter(SSC)•FL1-FITC•FL2-PE•FL3-PerCP•PL4-APC流式细胞的基本信息:“形态”流式细胞的主要信息:Fluorescence•FL1•FL2•FL3•FL4最常用的标记方法是荧光素分子标记的抗体与细胞抗原结合Gating常用术语流式常见图形(HistogramPlot)直方图适用于：单参数分析流式常见图形(DotPlot)散点图适用于：多参数分析流式应用常见范围•细胞大小•细胞的颗粒度•细胞表面分子：CD系列•细胞浆内分子：胞内细胞因子•细胞核内分子：P53•细胞功能检测：细胞周期、凋亡•其他（膜电位、钙离子浓度、核酸等）实验对照的设计•空白对照：ALL•阴性对照：常用同型抗体对照单色分析：设同型抗体对照多色分析：同型对照，单阳性对照（用于仪器校正）•阳性对照：检测阴性时实验标本的处理•单细胞悬液的制备：物理法（剪碎法、网搓法、研磨粉）化学法（酶消化）•抗体或标记分子的染色：抗原抗体反应•非特异结合的去除：洗涤和封闭封闭－－血清和同型抗体可用流式细胞仪分析...
