第三章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术第一节免疫细胞的分离一、外周血单个核细胞分离二、淋巴细胞的分离三、T细胞和B细胞的分离四、T细胞亚群的分离第二节淋巴细胞标志及亚群分类一、Ｔ细胞表面标志及亚群二、B细胞表面标志三、NK细胞表面标志第三节其他的免疫细胞第四节免疫细胞表面标志的检测及应用一、免疫细胞表面标志的检测方法二、淋巴细胞表面标志检测的临床意义思考题小结第一节免疫细胞的分离外周血单个核细胞分离淋巴细胞的分离T细胞和B细胞的分离T细胞亚群的分离一、外周血单个核细胞分离外周血单个核细胞（peripheralmononuclearcells,PMNC）包括淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。Ficoll分离液法主要用于分离外周血中的单个核细胞，是一种单次差速密度梯度离心的分离法。细胞分离基本原理不同细胞密度不同不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面分化抗原不同不同细胞密度不同人的红细胞密度为1.093粒细胞密度为1.092单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为1.075-1.090不同细胞密度不同用1.077±0.001的分层液可将细胞分离密度梯度离心(Ficoll)离心二、淋巴细胞分离贴壁粘附法吸附柱过滤法磁铁吸引法Percoll分离液法（连续密度梯度离心）（去单核细胞）E花环沉降法尼龙毛柱分离法三、T细胞和B细胞的分离四、T细胞亚群的分离亲和板结合分离法磁性微球分离法荧光激活细胞分离仪分离法荧光激活细胞分离仪分离法磁珠大小可以选择大小免疫磁珠分离细胞的特点比较比较项目大磁珠小磁珠对细胞的影响对细胞造成机械压力，影响其生物学活性，不利于分离后培养。对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养。对流式细胞仪的影响阻塞流式细胞仪的喷嘴，影响散射光。可直接上流式细胞仪检测，不影响散射光。分离条件要求技术简单，分离可在试管中完成。需要很强的磁场来分离细胞。收率得率高。得率不高。纯度纯度低。纯度高。分离时间分离速度快。分离速度慢。分离成本成本低。需要很强的磁场来分离细胞，需要一次性的分离柱，不能在普通试管进行。免疫磁珠法细胞分选过程免疫磁珠细胞分选装置全自动细胞分选系统流式细胞分析仪第二节淋巴细胞标志及亚群分类常用于鉴定和检测淋巴细胞表面标志是簇分化抗原（Clusterofdifferentiation，CD）。细胞表面分化抗原（CD抗原）适用于T、B细胞的分离已知CD抗原细胞亚群的分离未知CD抗原细胞亚群的分离（阴性分选）一、T细胞表面标志及其亚群CD3+CD...
