细菌样品冷冻干燥制样方法1)取样：取大量样品离心（转速3000r~4000r），去除上清液，加入适当PH（7.2~7.4）的0.1MPBS清洗三遍；清洗时菌体温柔悬浮。2)固定：2.5%戊二醛固定3h（此步时间非绝对，1~12h都可），用PBS清洗两遍，每遍10min。再用纯水清洗两遍。3)梯度脱水：用乙醇的水溶液按30%、50%、70%、80%、90%的浓度梯度对样品进行脱水，每步15min，之后在100%乙醇的水溶液中脱水15min×2次；再将样品置于乙醇和叔丁醇1:1混合液中15min；最后置样品于叔丁醇中15min×2次。（此步也可以尝试不做）4)冷冻干燥：滴加处理好的样品于5*5mm的盖玻片上，置-80度冰箱冷冻后放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥。5)电镜观察：样品充分干燥后，进行扫描电镜观察。2.5%戊二醛：Step1:0.2M磷酸缓冲液的配制：（0.1M的就是稀释2倍）取50mL定容100mL---------------------磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O）2.6克磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)29克双蒸馏水加至500毫升pH调至7.4Step2:戊二醛固定液的配制：---------------------25%戊二醛1ml双蒸馏水4ml0.2mol/L磷酸缓冲液5ml戊二醛最终浓度2.5%pH值7.3-7.4
