SYTOX系列染料Invitrogen的SYTOX系列染料也很受欢迎,它们是非通透性的花菁染料,尤其适合于死细胞的染色。使用起来也比较简单,只需要加到细胞,然后观察即可,不需要额外的洗涤,因为它们在水溶液中没有荧光。SYTOX染料适用于多个平台,包括荧光显微镜、流式细胞仪和酶标仪。整个系列目前有红、橙、黄、绿四种颜色。SYTOX绿色染料与核酸的亲和力是整个系列中最高的。一旦与核酸结合,荧光会增强500倍以上。哇,立马把PI比了下去。且它的碱基选择性最小,不像DAPI和PI那么挑剔,只认AT。SYTOX绿色染料可由常用的488nm激光或其他的450-490nm光源激发。它能轻松地透过质膜受损的细胞,但不能穿过活细胞膜。它还特别适合于革兰氏阳性菌、阴性菌及某些病毒粒子的染色,因为它很亮。SYTOX绿色染料能与红色、蓝色染料一起,进行多色分析。它还能与SYTO17红色染料进行死细胞和活细胞的共同染色。SYTOX蓝色染料也是一种高亲和力的核酸染料,只能渗透质膜受损的细胞。它与核酸结合后的最大吸收峰约为445nm,能被汞弧灯的436nm谱线所激发。与许多蓝色荧光染料不同,SYTOX蓝色染料还能被卤钨灯有效激发。在定量膜受损的细菌细胞上,SYTOX蓝色染料与绿色染料效果相当,同样也不会干扰细菌细胞的生长。不过蓝色和绿色的发射光谱有些重叠,因此SYTOX蓝色染料还是与橙色或红色探针一起使用,效果更佳。SYTOX橙色染料能清晰分辨死的细菌、酵母或哺乳动物细胞。它与PI相比,发射波长更短,它的光谱则更接近罗丹明的滤光片。此外,SYTOX橙色染料的消光系数比PI要高得多,在结合DNA时荧光显著增强,表明它作为死细胞染料或核酸复染剂,有着更高的灵敏度。SYTOX橙色染料还是利用流式细胞仪进行DNA片段筛选时的最佳染料。活细胞的染色Hoechst荧光染料大家耳熟能详的Hoechst系列染料是一种双苯甲亚胺(bisbenzimide)染料,主要有Hoechst33258和Hoechst33342等。它们是细胞膜通透性的小沟结合DNA染料,结合后发出明亮的荧光。Hoechst33342的膜通透性比Hoechst33258略好,相当易溶于水,细胞毒性小。它们可被大多数常用的荧光光源所激发,表现出相对较大的斯托克斯位移(激发/发射波长约为350/460nm),因此适合于多色标记实验。在未结合DNA时,它们有着复杂的pH依赖光谱,在pH5时的荧光产量比pH8时要高得多。SDS等表面活性剂还能使荧光增强。Hoechst染料普遍用于多个细胞分析,包括细胞周期和凋亡研究,而且它们还是常用的核酸复染剂。此外,Hoechst33258还有一个特殊的...