NSFC案例精讲班(四)解螺旋课堂2017酸菜解螺旋课堂0课程内容文献案例分析科学假设模式132标书写作讲解解螺旋课堂1文献案例分析解螺旋课堂1文献案例分析图1.建立肿瘤细胞-内皮细胞共培养体系，选择5株肿瘤细胞株，检测其影响的内皮细胞miRNA表达谱，对于趋势一致的miRNA分子，进行qPCR验证解螺旋课堂1文献案例分析图2.查找miRNA改变的来源，排除了细胞因子驱动，前体pre-miRNA改变，确认来源于肿瘤细胞分泌的微泡（microvesicles，MVs）解螺旋课堂1文献案例分析图3.肿瘤细胞分泌的微泡携带的miR-9能够促进内皮细胞迁移（过表达+抑制实验）解螺旋课堂1文献案例分析图4.在动物实验中，沉默miR-9能够抑制肿瘤血管生成，效果与anti-VEGF类似解螺旋课堂1文献案例分析图5.抗体芯片筛选通路发现miR-9能够影响内皮细胞JAK-STAT通路中STAT1,3、JAK1,2的磷酸化，数据库预测靶基因定位于SOCS5，并用荧光素酶报告实验证实SOCS5已知是JAK-STAT通路的负调节因子解螺旋课堂1文献案例分析图6.miR-9对STAT的活化依赖于JAK1,2（siRNA+抑制剂），表型：内皮细胞迁移，动物肿瘤大小解螺旋课堂1文献案例分析癌症JAK-STAT内皮细胞迁移血管生成miR-9科学假设：逻辑思路：A分子筛选miR-9…Fig.1BFig.2分子筛选miR-9…细胞微泡CFig.3,4miR-9细胞微泡内皮细胞迁移，动物血管生成DFig.5miR-9SOCS5JAK-STATEFig.6miR-9SOCS5JAK1，2STAT1，3GNE-372体外、体内表型微泡解螺旋课堂1文献案例分析解螺旋课堂1文献案例分析图1.检测不同乳腺癌细胞和胞外囊泡中的miR-122表达，分泌的miR-122主要存在于外泌体中，肿瘤细胞内表达无明显差异，推测主要作用于受体细胞解螺旋课堂1文献案例分析图2.在MCF10A中过表达miR-122可以显著改变葡萄糖代谢但对氨基酸代谢无影响，证实miR-122的靶基因是丙酮酸激酶(PKM)和柠檬酸合成酶(CS)，进一步回复实验证实PKM2是核心靶分子g：检测了PKM2的isoforms解螺旋课堂1文献案例分析图3.过表达miR-122位于胞外囊泡中影响受体细胞，肺成纤维细胞接受miR-122后PKM2和GLUT1表达下降，PKM活性降低，葡糖糖摄取显著减少解螺旋课堂1文献案例分析图4.囊泡中的miR-122也能够影响星形胶质细胞的葡萄糖摄取，机制与肺成纤维细胞中一致。而神经元不是miR-122的受体细胞。解螺旋课堂1文献案例分析图5.invivo（尾静脉注射EV）观察MCF10A和MDA-MB-231囊泡中miR-122过表达对脑和肺部预转移小巢的影响，验证其机制是抑制PKM2和GLUT1，减少葡萄糖摄取解螺旋课堂1文献案例分析图6...
