广东海洋大学学报JournalofGuangdongOceanUniversity第43卷第4期2023年7月Vol.43No.4Jul.2023邓小林，饶乐怡，徐静.CytochalasinH对小鼠脾细胞增殖的抑制作用及其对Ca2+/CaN/NFAT信号通路的影响[J].广东海洋大学学报,2023,43(4):19-26.收稿日期：2023-02-14基金项目：2022年度海南大学协同创新中心项目（XTCX2022STB01）；海南省重大科技项目（ZDKJ202008/ZDKJ202018）；海南省重点研发项目（ZDYF2021108）；国家自然科学基金（81973229/82160675）；广东省海洋药物重点实验室开放课题（LMM2021-4）第一作者：邓小林（1998―），硕士研究生，研究方向为红树林微生物代谢产物的免疫抑制药理活性机制。E-mail:20081700210002@hainanu.edu.cn通信作者：徐静（1981―），教授，研究方向为海南特有药用植物和红树林微生物天然产物化学以及药物先导化合物的开发。E-mail:happyjing3@163.comCytochalasinH对小鼠脾细胞增殖的抑制作用及其对Ca2+/CaN/NFAT信号通路的影响邓小林，饶乐怡，徐静(海南大学生态文明协同创新中心/海南大学化学工程与技术学院海南省精细化工工程技术研究中心，海南海口570228)摘要：【目的】研究红树林植物大红树内生真菌PhomopsisasparagiDHS-48得到的次级代谢产物cytochalasinH对小鼠（Musmusculus）脾细胞的免疫抑制活性及其作用机制。【方法】用不同浓度（3、6、12、25、30μmol/L）cytochalasinH处理小鼠脾细胞，通过CCK-8活力测定法检测其对刀豆蛋白A（ConcanavalinA，ConA）诱导小鼠脾细胞增殖的抑制作用；流式细胞术检测cytochalasinH对小鼠脾细胞凋亡的影响；免疫荧光实验检测cytochalasinH对细胞中NFAT入核及钙离子内流的影响；酶联免疫吸附法（Enzyme-linkedimmunesorbentassay，ELISA）和免疫蛋白印迹法（Westernblotting）测定cytochalasinH对脾细胞中NFAT信号通路的影响。【结果】CCK-8实验表明，cytochalasinH对于正常小鼠脾淋巴细胞的毒性比环孢菌素（CyclosporinA，CsA）弱，半抑制浓度IC50=（35.07±1.16）μmol/L；流式细胞术显示，cytochalasinH对ConA刺激的脾淋巴细胞无促凋亡作用；cytochalasinH对ConA诱导增殖的小鼠脾淋巴细胞具有显著的抑制效果，IC50=（14.81±0.81）μmol/L，且呈剂量依赖性；免疫荧光结果表明，cytochalasinH在浓度为15μmol/L时显著地抑制了钙离子内流；WesternBlotting结果显示cytochalasinH对脾淋巴细胞中CaN、NFAT蛋白（nuclearfactorofactivatedT-cells，NFAT）的表达具有显著的...
