中国医学科学院学报ACTAACADEMIAEMEDICINAESINICAEVol.45No.11基金项目:国家自然科学基金(81770296)·论著·微小ＲNA-22-3p调控Kruppel样因子6表达对骨髓间充质干细胞心肌样分化的影响钟晓鸣，张蕾，姚新亮，刘洪洋，张媛，万琪琳，李彦明，程冠昌河南大学淮河医院心血管内科，河南开封475000通信作者:李彦明电话:0371-23906832，电子邮件:yanminglee@163.com摘要:目的探究微小ＲNA-22-3p(miＲ-22-3p)调控Kruppel样因子6(KLF6)表达对骨髓间充质干细胞(BMSC)心肌样分化的影响。方法分离并培养大鼠BMSC，将第3代BMSC分为对照组、5-氮杂胞苷(5-AZA)组、模拟物阴性对照组、miＲ-22-3p模拟物组、miＲ-22-3p模拟物+空载质粒组、miＲ-22-3p模拟物+KLF6过表达质粒组;实时荧光定量PCＲ(qＲT-PCＲ)检测细胞中miＲ-22-3p及KLF6表达;免疫荧光化学染色法检测细胞结蛋白(Desmin)、肌钙蛋白T(cTnT)、间隙连接蛋白43(Cx43)表达;Westernblot检测Desmin、cTnT、Cx43、KLF6蛋白表达;流式细胞术检测BMSC凋亡情况;采用双荧光素酶报告基因实验分析miＲ-22-3p和KLF6的靶向关系。结果与对照组比较，5-AZA组BMSC中miＲ-22-3p(q=7.971，P＜0.001)、Desmin(q=7.876，P＜0.001)、cTnT(q=10.272，P＜0.001)、Cx43表达(q=6.256，P＜0.001)以及细胞凋亡率(q=12.708，P＜0.001)显著增加，而KLF6mＲNA(q=20.850，P＜0.001)及蛋白表达(q=11.080，P＜0.001)显著降低;与5-AZA组和模拟物阴性对照组比较，miＲ-22-3p模拟物组BMSC中miＲ-22-3p(q=3.591，P＜0.001;q=11.650，P＜0.001)、Desmin(q=5.975，P＜0.001;q=13.579，P＜0.001)、cTnT(q=7.133，P＜0.001;q=17.548，P＜0.001)、Cx43表达(q=4.571，P=0.037;q=11.068，P＜0.001)显著增加，而KLF6mＲNA(q=7.384，P＜0.001;q=28.234，P＜0.001)及蛋白表达(q=4.594，P=0.036;q=15.945，P＜0.001)显著降低，miＲ-22-3p模拟物组细胞凋亡率显著低于5-AZA组(q=8.216，P＜0.001);与miＲ-22-3p模拟物+空载质粒组比较，miＲ-22-3p模拟物+KLF6过表达质粒组KLF6mＲNA(q=23.891，P＜0.001)及蛋白表达(q=13.378，P＜0.001)显著增加，Desmin(q=9.505，P＜0.001)、cTnT(q=10.985，P＜0.001)、Cx43表达(q=8.301，P＜0.001)显著降低，细胞凋亡率增加(q=4.713，P=0.029)。双荧光素酶报告基因实验发现KLF6是miＲ-22-3p的潜在靶基因。结论miＲ-22-3p通过抑制KLF6表达来促进BMSC心肌样分化。关键词:微小ＲNA-22-3p;Kruppel样因子6;骨髓间充质干细胞;心肌样分化...
